Efficient cryopreservation of small numbers of human spermatozoa is essential in cases of severe male infertility, especially those requiring surgical sperm retrieval. Although vitrifying individual spermatozoa on sperm vitrification devices (SpermVD®) provided optimal cell retrieval upon warming, motility rates tended to be lower than with bulk-freezing. Post-warming motility is directly affected by cryoprotectant exposure; however, optimal cryoprotectant equilibration time is unknown. We evaluated several timeframes exposing individual spermatozoa to cryoprotectant before freezing and different cryoprotectants. A total of 2,925 spermatozoa from 20 patients ranging from normozoospermic to moderate oligoteratoasthenozoospermic were vitrified in small groups, on 60 SpermVD®, in 1 µl droplets of 1:1 v/v cryoprotectant/washing medium mixture. Each group was vitrified after 2–60 minutes equilibration time. Motility of each group was evaluated after warming. Leftover pellets were frozen in cryotubes in a mixture of 1:1 v/v cryoprotectant/washing medium after 10 minutes equilibration at room temperature and 10 minutes on liquid nitrogen vapors. Post-thaw motility correlated negatively with cryoprotectant exposure time. The highest post-warming motility rate (32.1%) was observed with 8-minutes equilibration. After 10 minutes, motility rate of vitrified sperm was lower than that of bulk-freezing (31.7% vs. 37.0%, p < 0.0001). Different cryoprotectants did not affect the results. Therefore, for vitrifying small numbers of spermatozoa, we suggest maximum equilibration time of 8-minutes to achieve maximum motility after warming.

对于严重的男性不育症，尤其是那些需要手术取出精子的病例，有效冷冻保存少量人类精子至关重要。尽管在精子玻璃化装置（SpermVD®）上对单个精子进行玻璃化可在升温时提供最佳的细胞回收，但运动速度往往比批量冷冻时要低。加温后的运动直接受到防冻剂暴露的影响；但是，最佳的防冻剂平衡时间未知。我们评估了几个时间框架，在冷冻前将单个精子和不同的冷冻保护剂暴露于冷冻保护剂中。从60个SpermVD®上，以1组1：1 v / v冷冻保护剂/洗涤液混合物的液滴，将20例从正常精子到中度少精症的少精子中的2,925精子玻璃化。每组在2-60分钟的平衡时间后玻璃化。加热后评价各组的运动性。在室温下平衡10分钟并在液氮蒸汽中平衡10分钟后，将剩余的沉淀物在1：1 v / v冷冻保护剂/洗涤介质的混合物中冷冻在冷冻管中。解冻后动力与防冻剂暴露时间负相关。平衡8分钟后，观察到最高的升温后运动率（32.1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。加热后评价各组的运动性。在室温下平衡10分钟并在液氮蒸汽中平衡10分钟后，将剩余的沉淀物在1：1 v / v冷冻保护剂/洗涤介质的混合物中冷冻在冷冻管中。解冻后动力与防冻剂暴露时间负相关。平衡8分钟后，观察到最高的升温后运动率（32.1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。加热后评价各组的运动性。在室温下平衡10分钟并在液氮蒸汽中平衡10分钟后，将剩余的沉淀物在1：1 v / v冷冻保护剂/洗涤介质的混合物中冷冻在冷冻管中。解冻后动力与防冻剂暴露时间负相关。平衡8分钟后，观察到最高的升温后运动率（32.1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。在室温下平衡10分钟并在液氮蒸气上平衡10分钟后，使用1 v / v冷冻保护剂/洗涤介质。解冻后动力与防冻剂暴露时间负相关。平衡8分钟后，观察到最高的升温后运动率（32.1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。在室温下平衡10分钟并在液氮蒸气上平衡10分钟后，使用1 v / v冷冻保护剂/洗涤介质。解冻后动力与防冻剂暴露时间负相关。平衡8分钟后，观察到最高的升温后运动率（32.1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。8分钟平衡后观察到1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。8分钟平衡后观察到1％）。10分钟后，玻璃化精子的运动速率低于大块冷冻的运动速率（31.7％对37.0％，p <0.0001）。不同的防冻剂不会影响结果。因此，为使少量的精子玻璃化，我们建议最大的平衡时间为8分钟，以在升温后达到最大的活力。