The aims of this project were to transfer hormone-induced spermiation and sperm cryopreservation protocols developed in the model salamander species, Ambystoma tigrinum, to three threatened newt species. Additionally, we tested if supplementation with trehalose or thawing at different temperatures impacts post-thaw sperm parameters. Hormone stimulation protocols were applied to male Notophthalmus meridionalis (N = 10), Neurergus kaiseri (N = 5) and Tylototriton kweichowensis (N = 6) with sperm collected periodically up to 24-28 h post-spermiation dose. Samples of adequate sperm concentration (>70%) were cryopreserved in solutions of 10% Me2SO + 1% BSA with or without a 10% trehalose cryodiluent. Frozen sperm samples were thawed at either 20 °C or 40 °C and examined for post-thaw motility parameters and abnormalities in head and tail structure. The spermiation response to exogenous hormone treatment was significantly different between newt species, with a success rate of 0% for N. kaiseri, 67% for T. kweichowensis, and 100% for N. meridionalis. Sperm concentration varied with time of collection after hormone administration in both T. kweichowensis and N. meridionalis. For N. meridionalis, structural abnormalities decreased in samples collected over the 24 h period (p < 0.0001) and a thaw temperature of 40 °C resulted in higher relative total sperm motility (p < 0.0001). This is the first study to describe the cryopreservation of sperm from two newt species and demonstrates the transferability of ART developed in a salamander to two newt species.

中文翻译：

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受威胁的蝾螈物种的精子收集和冷冻保存

该项目的目的是将在模式蝾螈物种 Ambystoma tigrinum 中开发的激素诱导精子形成和精子冷冻保存协议转移到三个受威胁的蝾螈物种。此外，我们测试了补充海藻糖或在不同温度下解冻是否会影响解冻后的精子参数。激素刺激方案应用于雄性 Notophthalmus meridionalis (N = 10)、Neurergus kaiseri (N = 5) 和 Tylototriton kweichowensis (N = 6)，并定期收集精子，直至受精后 24-28 小时给药。将具有足够精子浓度 (>70%) 的样品冷冻保存在 10% Me2SO + 1% BSA 的溶液中，含有或不含 10% 海藻糖冷冻稀释剂。冷冻精子样本在 20 °C 或 40 °C 下解冻，并检查解冻后的运动参数和头部和尾部结构的异常。不同种类的蝾螈对外源激素处理的精子形成反应存在显着差异，凯塞里猪笼草的成功率为 0%，贵州猪笼草的成功率为 67%，子午线虫的成功率为 100%。T. kweiichowensis 和 N. meridionalis 在激素给药后精子浓度随收集时间而变化。对于 N. meridionalis，在 24 小时内收集的样本中结构异常减少 (p < 0.0001)，40 °C 的解冻温度导致较高的相对总精子活力 (p < 0.0001)。这是第一项描述来自两个蝾螈物种的精子的冷冻保存的研究，并证明了在蝾螈中开发的 ART 可转移到两个蝾螈物种。kaiseri, 贵州白蚁为 67%，子午线鼠为 100%。T. kweiichowensis 和 N. meridionalis 在激素给药后精子浓度随收集时间而变化。对于 N. meridionalis，在 24 小时内收集的样本中结构异常减少 (p < 0.0001)，40 °C 的解冻温度导致较高的相对总精子活力 (p < 0.0001)。这是第一项描述来自两个蝾螈物种的精子的冷冻保存的研究，并证明了在蝾螈中开发的 ART 可转移到两个蝾螈物种。kaiseri, 贵州白蚁为 67%，子午线鼠为 100%。T. kweiichowensis 和 N. meridionalis 在激素给药后精子浓度随收集时间而变化。对于 N. meridionalis，在 24 小时内收集的样本中结构异常减少 (p < 0.0001)，40 °C 的解冻温度导致较高的相对总精子活力 (p < 0.0001)。这是第一项描述来自两个蝾螈物种的精子的冷冻保存的研究，并证明了在蝾螈中开发的 ART 可转移到两个蝾螈物种。在 24 小时内收集的样本中结构异常减少 (p < 0.0001)，40 °C 的解冻温度导致较高的相对总精子活力 (p < 0.0001)。这是第一项描述来自两个蝾螈物种的精子的冷冻保存的研究，并证明了在蝾螈中开发的 ART 可转移到两个蝾螈物种。在 24 小时内收集的样本中结构异常减少 (p < 0.0001)，40 °C 的解冻温度导致较高的相对总精子活力 (p < 0.0001)。这是第一项描述来自两个蝾螈物种的精子的冷冻保存的研究，并证明了在蝾螈中开发的 ART 可转移到两个蝾螈物种。