An antigenic cystatin-like protein (Ts-CLP) selected from cDNA library of intestinal infective larvae at 6 h post-infection, was expressed by prokaryotes in the form of a histidine-tagged protein (rTs-CLP). The fusion protein was purified by an on-column refolding procedure using Ni-NTA affinity chromatography. An indirect rTs-CLP ELISA was developed using 270 known negative serum samples from commercial swine maintained under non-special pathogen free conditions. Based on the distribution of the signal-to-positive (S/P) ratio, a cut-off value was set at 0.30. Using this cut-off value, rTs-CLP ELISA was evaluated using sera from swine experimentally infected with 1000 and 50,000 muscle larvae of Trichinella spiralis. Specific IgG antibodies were detectable by rTs-CLP ELISA as soon as 17 days post-infection (dpi), but the commercial ELISA kit based on excretory-secretory (ES) antigens did not permit detection before 21 dpi. Three monoclonal antibodies (McAbs) against Ts-CLP (designated 1H9, 6B5 and 7F8) were obtained by screening with both rTs-CLP ELISA and ES ELISA methods. Two dominant epitopes recognized by McAbs were determined by analysis with overlapping fusion peptides and synthetic peptides. One epitope 39 HEALFSSDLKQESGV 53 was recognized by 1H9 and 6B5, and the other epitope 178 REALFSSDSKEQSGV 192 was recognized by 7F8. The generation of McAbs against Ts-CLP and the characterization of the two dominant epitopes provide a foundation for the development of a specific early serodiagnostic strategy for T. spiralis infection.

中文翻译：

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使用单克隆抗体对旋毛虫的半胱氨酸蛋白酶抑制剂样蛋白进行血清学诊断和鉴定免疫优势表位的评价。

从感染后 6 小时肠道感染性幼虫 cDNA 文库中选择的抗原性胱抑素样蛋白 (Ts-CLP) 由原核生物以组氨酸标记蛋白 (rTs-CLP) 的形式表达。融合蛋白通过柱上重折叠程序使用 Ni-NTA 亲和层析进行纯化。使用来自在非特殊无病原体条件下饲养的商业猪的 270 个已知阴性血清样品开发了一种间接 rTs-CLP ELISA。根据信号阳性 (S/P) 比的分布，将临界值设置为 0.30。使用该临界值，使用来自实验感染了 1000 和 50,000 只旋毛虫肌肉幼虫的猪的血清评估了 rTs-CLP ELISA。感染后 17 天 (dpi) 即可通过 rTs-CLP ELISA 检测到特异性 IgG 抗体，但是基于排泄-分泌 (ES) 抗原的商业 ELISA 试剂盒在 21 dpi 之前不允许检测。通过使用 rTs-CLP ELISA 和 ES ELISA 方法进行筛选，获得了三种针对 Ts-CLP（指定为 1H9、6B5 和 7F8）的单克隆抗体（McAb）。通过分析重叠融合肽和合成肽，确定了 McAb 识别的两个主要表位。一个表位 39 HEALFSSDLKQESGV 53 被 1H9 和 6B5 识别，另一个表位 178 REALFSSDSKEQSGV 192 被 7F8 识别。针对 Ts-CLP 的 McAb 的产生和两个主要表位的表征为 T.spiriis 感染的特定早期血清诊断策略的开发提供了基础。通过使用 rTs-CLP ELISA 和 ES ELISA 方法进行筛选，获得了三种针对 Ts-CLP（指定为 1H9、6B5 和 7F8）的单克隆抗体（McAb）。通过分析重叠融合肽和合成肽，确定了 McAb 识别的两个主要表位。一个表位 39 HEALFSSDLKQESGV 53 被 1H9 和 6B5 识别，另一个表位 178 REALFSSDSKEQSGV 192 被 7F8 识别。针对 Ts-CLP 的 McAb 的产生和两个主要表位的表征为 T.spiriis 感染的特定早期血清诊断策略的开发提供了基础。通过使用 rTs-CLP ELISA 和 ES ELISA 方法进行筛选，获得了三种针对 Ts-CLP（指定为 1H9、6B5 和 7F8）的单克隆抗体（McAb）。通过分析重叠融合肽和合成肽，确定了 McAb 识别的两个主要表位。一个表位 39 HEALFSSDLKQESGV 53 被 1H9 和 6B5 识别，另一个表位 178 REALFSSDSKEQSGV 192 被 7F8 识别。针对 Ts-CLP 的 McAb 的产生和两个主要表位的表征为 T.spillis 感染的特定早期血清诊断策略的开发提供了基础。一个表位 39 HEALFSSDLKQESGV 53 被 1H9 和 6B5 识别，另一个表位 178 REALFSSDSKEQSGV 192 被 7F8 识别。针对 Ts-CLP 的 McAb 的产生和两个主要表位的表征为 T.spiriis 感染的特定早期血清诊断策略的开发提供了基础。一个表位 39 HEALFSSDLKQESGV 53 被 1H9 和 6B5 识别，另一个表位 178 REALFSSDSKEQSGV 192 被 7F8 识别。针对 Ts-CLP 的 McAb 的产生和两个主要表位的表征为 T.spillis 感染的特定早期血清诊断策略的开发提供了基础。