Due to the development of acaricide resistance in Tetranychusurticae, a rapid and accurate monitoring method for acaricide resistance gene frequency is required for resistance management. In this study, we developed a new diagnostic gene frequency prediction method, using quantitative real-time PCR with allele-specific primer sets, for mutation of I1017F in chitin synthase I, G126S in mitochondrial cytochrome b, and H110R in the PSST subunit of mitochondrial electron transport complex I, which are involved in etoxazole, bifenazate, and pyridaben resistance in T. urticae, respectively. Resistance allele frequencies computed using the 2−ΔΔCq method, in mixtures of resistance and wild-type (susceptible) alleles, were strongly correlated with the actual frequencies of the resistance alleles in DNA samples for all three acaricides (regression slopes of 0.945–0.996; R2 > 0.99). This result strongly indicates that resistance allele frequency in a population can be accurately predicted using a diagnostic quantitative real-time PCR method with a resistance allele-specific primer set. Finally, we applied this method to nine field populations and successfully determined resistance allele frequencies for the three acaricides. Overall, this diagnostic prediction method may contribute to the development of acaricide resistance management strategies, via monitoring resistance allele frequencies for a wide range of acaricides.

中文翻译：

---

在双斑叶螨 Tetranychusurticae 种群（Acari：Tetranychidae）中使用具有抗性等位基因特异性引物的定量实时 PCR 诊断预测杀螨剂抗性基因频率

由于叶螨科杀螨剂抗性的发展，抗性管理需要一种快速准确的杀螨剂抗性基因频率监测方法。在这项研究中，我们开发了一种新的诊断基因频率预测方法，使用实时定量 PCR 和等位基因特异性引物组，用于几丁质合酶 I 中的 I1017F、线粒体细胞色素 b 中的 G126S 和线粒体 PSST 亚基中的 H110R 的突变。电子传递复合物 I，分别与荨麻疹的乙恶唑、联苯那酯和哒螨灵抗性有关。使用 2−ΔΔCq 方法计算的抗性等位基因频率，在抗性和野生型（易感）等位基因的混合物中，与所有三种杀螨剂的 DNA 样品中抗性等位基因的实际频率密切相关（回归斜率 0.945-0.996；R2 > 0.99）。该结果有力地表明，使用具有抗性等位基因特异性引物组的诊断性定量实时 PCR 方法可以准确预测群体中的抗性等位基因频率。最后，我们将此方法应用于九个野外种群，并成功确定了三种杀螨剂的抗性等位基因频率。总体而言，这种诊断预测方法可能有助于通过监测各种杀螨剂的抗性等位基因频率来制定杀螨剂抗性管理策略。该结果有力地表明，使用具有抗性等位基因特异性引物组的诊断性定量实时 PCR 方法可以准确预测群体中的抗性等位基因频率。最后，我们将此方法应用于九个野外种群，并成功确定了三种杀螨剂的抗性等位基因频率。总体而言，这种诊断预测方法可能有助于通过监测各种杀螨剂的抗性等位基因频率来制定杀螨剂抗性管理策略。该结果有力地表明，使用具有抗性等位基因特异性引物组的诊断性定量实时 PCR 方法可以准确预测群体中的抗性等位基因频率。最后，我们将此方法应用于九个野外种群，并成功确定了三种杀螨剂的抗性等位基因频率。总体而言，这种诊断预测方法可能有助于通过监测各种杀螨剂的抗性等位基因频率来制定杀螨剂抗性管理策略。