Abstract This paper presents results from the first application of molecular-genetic analysis combined with conventional light microscopy (LM) for identification of cylindrospermopsin (CYN) producers in field phytoplankton samples from Bulgaria. In total 68 cyanoprokaryotes were found by LM, out of which 18 were considered potential CYN-producers according to the literature. They occurred in different abundance (0-40%) in five waterbodies. The presence of CYN-producers was sought by application of the primer pair cynsulfF/cylnamR specific for the sulfotransferase gene (cyrJ) considered the best genetic marker for detection of CYN-toxigenic strains. Although CYN was detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in two waterbodies (lake Vaya and reservoir Mandra), we did not find cyanoprokaryotes with cyrJ gene. Therefore, Raphidiopsis raciborskii, despite being identified by LM in both waterbodies where CYN occurred, was not the producer of this toxin and belonged to the European nontoxic population of the species. The same was true for the less widely spread Raphidiopsis mediterranea and Chrysosporum bergii (both found in small amounts only in lake Vaya). Our results on CYN occurrence without the assignment of its producer in the collected samples suggest that: 1) CYN remains stable in water after disappearance of the toxigenic species, or, more probably, 2) besides the already known species, there are others that are associated with the production of CYN. Because revealing of novel CYN producers is of ultimate importance for health risk assessment and water management, we propose more analyses to be performed in future studies.

中文翻译：

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在保加利亚九个浅水体中对圆柱藻素生产者的试点搜索揭示了 Raphidiopsis raciborskii、R. mediterranea 和 Chrysosporum bergii 的无毒菌株

摘要 本文介绍了分子遗传分析与传统光学显微镜 (LM) 相结合的首次应用结果，用于鉴定保加利亚野外浮游植物样品中的柱状植物素 (CYN) 生产者。LM 总共发现了 68 种氰基原核生物，其中 18 种被认为是潜在的 CYN 生产者。它们在五个水体中以不同的丰度 (0-40%) 出现。通过应用对磺基转移酶基因 (cyrJ) 特异的引物对 cynsulfF/cylnamR 来寻找 CYN 生产者的存在，该基因被认为是检测 CYN 产毒菌株的最佳遗传标记。虽然通过酶联免疫吸附试验（ELISA）在两个水体（瓦亚湖和曼德拉水库）中检测到 CYN，但我们没有发现带有 cyrJ 基因的氰原核生物。所以，Raphidiopsis raciborskii，尽管在发生 CYN 的两个水体中都被 LM 鉴定，但不是这种毒素的生产者，属于该物种的欧洲无毒种群。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。尽管在发生 CYN 的两个水体中都被 LM 鉴定，但它不是这种毒素的生产者，并且属于该物种的欧洲无毒种群。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。尽管在发生 CYN 的两个水体中都被 LM 鉴定，但它不是这种毒素的生产者，并且属于该物种的欧洲无毒种群。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。不是这种毒素的生产者，属于该物种的欧洲无毒种群。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。不是这种毒素的生产者，属于该物种的欧洲无毒种群。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。对于分布较不广泛的 Raphidiopsis mediterranea 和 Chrysosporum bergii（两者都仅在 Vaya 湖中发现少量）也是如此。我们在收集样本中未指定其生产者的情况下对 CYN 发生的结果表明：1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是，2) 除了已知物种外，还有其他物种与 CYN 的生产有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是， 2) 除了已知物种之外，还有其他物种与 CYN 的产生有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。1) CYN 在产毒物种消失后在水中保持稳定，或者，更有可能的是， 2) 除了已知物种之外，还有其他物种与 CYN 的产生有关。由于揭示新型 CYN 生产者对健康风险评估和水管理至关重要，因此我们建议在未来的研究中进行更多分析。