Leucyl-tRNA synthetases (LRS) catalyze the linkage of leucine with tRNALeu. A large insertion CP1 domain (Connective Polypeptide 1) in LRS is responsible for post-transfer editing of mis-charged aminoacyl-tRNAs. Here, we characterized the CP1 domain of Leishmania donovani, a protozoan parasite, and its role in editing activity and interaction with broad spectrum anti-fungal, AN2690. The deletion mutant of LRS, devoid of CP1 domain (LRS-CP1Δ) was constructed, followed by determination of its role in editing and aminoacylation. Binding of AN2690 and different amino acids with CP1 deletion mutant and full length LRS was evaluated using isothermal titration calorimetry (ITC) and molecular dynamics simulations. The recombinant LRS-CP1Δ protein did not catalyze the aminoacylation and the editing reaction when compared to full-length LRS. Thus, indicating that CP1 domain was imperative for both aminoacylation and editing activities of LRS. Binding studies with different amino acids indicated selectivity of isoleucine by CP1 domain over other amino acids. These studies also indicated high affinity of AN2690 with the editing domain. Molecular docking studies indicated that AN2690-CP1 domain complex was stabilized by hydrogen bonding and hydrophobic interactions resulting in high binding affinity between the two. Our data suggests CP1 is crucial for the function of L. donovani LRS.

中文翻译：

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破译苯并恶唑抑制剂 AN2690 与利什曼原虫亮氨酰 tRNA 合成酶的连接多肽 1 (CP1) 编辑域的相互作用

亮氨酰-tRNA 合成酶 (LRS) 催化亮氨酸与 tRNALeu 的连接。LRS 中的一个大插入 CP1 域（连接多肽 1）负责错误充电的氨酰 tRNA 的转移后编辑。在这里，我们描述了多诺瓦利什曼原虫（一种原生动物寄生虫）的 CP1 域及其在编辑活动中的作用以及与广谱抗真菌剂 AN2690 的相互作用。构建了缺乏 CP1 结构域的 LRS 缺失突变体 (LRS-CP1Δ)，然后确定其在编辑和氨酰化中的作用。使用等温滴定量热法 (ITC) 和分子动力学模拟评估 AN2690 和不同氨基酸与 CP1 缺失突变体和全长 LRS 的结合。与全长 LRS 相比，重组 LRS-CP1Δ 蛋白不催化氨酰化和编辑反应。因此，表明 CP1 域对于 LRS 的氨酰化和编辑活动都是必不可少的。不同氨基酸的结合研究表明 CP1 结构域对异亮氨酸的选择性优于其他氨基酸。这些研究还表明 AN2690 与编辑域的高度亲和力。分子对接研究表明 AN2690-CP1 结构域复合物通过氢键和疏水相互作用稳定，从而导致两者之间的高结合亲和力。我们的数据表明 CP1 对 L. donovani LRS 的功能至关重要。分子对接研究表明 AN2690-CP1 结构域复合物通过氢键和疏水相互作用稳定，从而导致两者之间的高结合亲和力。我们的数据表明 CP1 对 L. donovani LRS 的功能至关重要。分子对接研究表明 AN2690-CP1 结构域复合物通过氢键和疏水相互作用稳定，从而导致两者之间的高结合亲和力。我们的数据表明 CP1 对 L. donovani LRS 的功能至关重要。