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Development of dipstick enzyme linked immunosorbent assay for on-site sero-diagnosis of Japanese encephalitis in swine.
Journal of Virological Methods ( IF 3.1 ) Pub Date : 2020-04-27 , DOI: 10.1016/j.jviromet.2020.113876 J Chauhan 1 , H Dhanze 1 , Chethan Kumar H B 2 , M Suman Kumar 1 , K N Bhilegaonkar 1
Journal of Virological Methods ( IF 3.1 ) Pub Date : 2020-04-27 , DOI: 10.1016/j.jviromet.2020.113876 J Chauhan 1 , H Dhanze 1 , Chethan Kumar H B 2 , M Suman Kumar 1 , K N Bhilegaonkar 1
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Japanese encephalitis (JE) is an important viral zoonotic disease in Asia, especially in rural and suburban areas where rice cultivation and pig farming coexist. Pigs serve as a suitable sentinel model, the surveillance of which could predict a potential JE outbreak in human population in the immediate vicinity. However, existing diagnostics like ELISA and VNT require sophisticated laboratory facilities which are more often not available in field conditions. In the present study, we aimed at developing recombinant non-structural (NS1) protein-based dipstick IgG ELISA as an on-site assay for sero-diagnosis of JE in swine. The assay was standardized by optimizing various parameters and the following conditions were found to be ideal including 1 μg of rNS1 protein in carbonate buffer per strip of nitrocellulose membrane comb; bovine serum albumin as blocking agent at 4 °C overnight; serum dilution of 1:10 and conjugate dilution of 1:5000 in skimmed milk powder. Relative diagnostic sensitivity and specificity of dipstick IgG ELISA was 100% and 92.9%, respectively. The dipstick assay was validated in three laboratories as per OIE guidelines. The storage life of dipstick was up to 7 months at 4 °C. The assay is easy to perform and the results can be interpreted with visual observation that precludes the need for absorbance reading equipment. The standardized dipstick assay was found promising for screening swine serum samples in field conditions. Timely detection of JE virus in swine will aid in predicting the outbreak in humans and thus in taking suitable preventive and control measures.
中文翻译:
试纸法酶联免疫吸附测定法在猪日本脑炎的血清学诊断中的应用
日本脑炎(JE)在亚洲是一种重要的病毒性人畜共患病,尤其是在水稻种植和养猪业共存的农村和郊区。猪是合适的前哨模型,对其进行监视可预测附近人群中可能发生的JE爆发。但是,现有的诊断方法(例如ELISA和VNT)需要复杂的实验室设备,而这些设备在现场条件下通常不可用。在本研究中,我们旨在开发基于重组非结构(NS1)蛋白的试纸IgG ELISA,作为猪JE血清学诊断的现场检测方法。通过优化各种参数对测定法进行了标准化,发现以下条件是理想的:每条硝酸纤维素膜梳在碳酸盐缓冲液中含1μgrNS1蛋白;牛血清白蛋白作为封闭剂在4°C过夜;脱脂奶粉中的血清稀释度为1:10,缀合物稀释度为1:5000。试纸IgG ELISA的相对诊断灵敏度和特异性分别为100%和92.9%。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于执行,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的暴发,从而采取适当的预防和控制措施。5000脱脂奶粉。试纸IgG ELISA的相对诊断灵敏度和特异性分别为100%和92.9%。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于实施,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的疫情,从而采取适当的预防和控制措施。5000脱脂奶粉。试纸IgG ELISA的相对诊断灵敏度和特异性分别为100%和92.9%。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于实施,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的疫情,从而采取适当的预防和控制措施。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于实施,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的疫情,从而采取适当的预防和控制措施。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于执行,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的暴发,从而采取适当的预防和控制措施。
更新日期:2020-04-27
中文翻译:
试纸法酶联免疫吸附测定法在猪日本脑炎的血清学诊断中的应用
日本脑炎(JE)在亚洲是一种重要的病毒性人畜共患病,尤其是在水稻种植和养猪业共存的农村和郊区。猪是合适的前哨模型,对其进行监视可预测附近人群中可能发生的JE爆发。但是,现有的诊断方法(例如ELISA和VNT)需要复杂的实验室设备,而这些设备在现场条件下通常不可用。在本研究中,我们旨在开发基于重组非结构(NS1)蛋白的试纸IgG ELISA,作为猪JE血清学诊断的现场检测方法。通过优化各种参数对测定法进行了标准化,发现以下条件是理想的:每条硝酸纤维素膜梳在碳酸盐缓冲液中含1μgrNS1蛋白;牛血清白蛋白作为封闭剂在4°C过夜;脱脂奶粉中的血清稀释度为1:10,缀合物稀释度为1:5000。试纸IgG ELISA的相对诊断灵敏度和特异性分别为100%和92.9%。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于执行,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的暴发,从而采取适当的预防和控制措施。5000脱脂奶粉。试纸IgG ELISA的相对诊断灵敏度和特异性分别为100%和92.9%。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于实施,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的疫情,从而采取适当的预防和控制措施。5000脱脂奶粉。试纸IgG ELISA的相对诊断灵敏度和特异性分别为100%和92.9%。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于实施,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的疫情,从而采取适当的预防和控制措施。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于实施,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的疫情,从而采取适当的预防和控制措施。根据OIE指南,在三个实验室中对量油尺测定进行了验证。在4°C下,量油尺的存储寿命可达7个月。该测定法易于执行,并且可以通过目视观察来解释结果,从而无需使用吸光度读取设备。发现标准量油尺测定法有望在田间条件下筛选猪血清样品。及时检测猪中的JE病毒有助于预测人类的暴发,从而采取适当的预防和控制措施。