The analysis of tumour‐associated macrophages (TAMs) has a high potential to predict cancer recurrence and response to immunotherapy. However, the heterogeneity of TAMs poses a challenge for quantitative and qualitative measurements. Here, we critically evaluated by immunohistochemistry and flow cytometry two commonly used pan‐macrophage markers (CD14 and CD68) as well as some suggested markers for tumour‐promoting M2 macrophages (CD163, CD204, CD206 and CD209) in human non–small cell lung cancer (NSCLC). Tumour, non‐cancerous lung tissue and blood were investigated. For immunohistochemistry, CD68 was confirmed to be a useful pan‐macrophage marker although careful selection of antibody was found to be critical. The widely used anti‐CD68 antibody clone KP‐1 stains both macrophages and neutrophils, which is problematic for TAM quantification because lung tumours contain many neutrophils. For TAM counting in tumour sections, we recommend combined labelling of CD68 with a cell membrane marker such as CD14, CD163 or CD206. In flow cytometry, the commonly used combination of CD14 and HLA‐DR was found to not be optimal because some TAMs do not express CD14. Instead, combined staining of CD68 and HLA‐DR is preferable to gate all TAMs. Concerning macrophage phenotypic markers, the scavenger receptor CD163 was found to be expressed by a substantial fraction (50%‐86%) of TAMs with a large patient‐to‐patient variation. Approximately 50% of TAMs were positive for CD206. Surprisingly, there was no clear overlap between CD163 and CD206 positivity, and three distinct TAM sub‐populations were identified in NSCLC tumours: CD163⁺CD206⁺, CD163⁺CD206⁻ and CD163⁻CD206⁻. This work should help develop macrophage‐based prognostic tools for cancer.

中文翻译：

---

用于优化人肺肿瘤中巨噬细胞染色的抗体组合。

肿瘤相关巨噬细胞（TAM）的分析具有预测癌症复发和对免疫疗法反应的巨大潜力。但是，TAM的异质性给定量和定性测量带来了挑战。在这里，我们通过免疫组织化学和流式细胞仪对两种常用的全巨噬细胞标志物（CD14和CD68）以及一些在人类非小细胞肺中促进肿瘤的M2巨噬细胞的标志物（CD163，CD204，CD206和CD209）进行了严格评估。癌症（NSCLC）。研究了肿瘤，非癌性肺组织和血液。对于免疫组织化学，CD68被确认是有用的全巨噬细胞标记物，尽管发现仔细选择抗体是至关重要的。广泛使用的抗CD68抗体克隆KP-1对巨噬细胞和嗜中性粒细胞均进行染色，对于TAM定量，这是有问题的，因为肺肿瘤中含有许多中性粒细胞。对于肿瘤切片中的TAM计数，我们建议将CD68与细胞膜标记物（例如CD14，CD163或CD206）组合标记。在流式细胞仪中，由于某些TAM不表达CD14，因此发现CD14和HLA-DR的常用组合不是最佳的。取而代之的是，将CD68和HLA-DR结合染色最好用于所有TAM。关于巨噬细胞表型标记，发现清道夫受体CD163在TAM中有很大一部分（50％-86％）表达，且患者之间差异很大。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163 我们建议将CD68与细胞膜标记物（例如CD14，CD163或CD206）一起标记。在流式细胞仪中，由于某些TAM不表达CD14，因此发现CD14和HLA-DR的常用组合不是最佳的。取而代之的是，将CD68和HLA-DR结合染色最好用于所有TAM。关于巨噬细胞表型标记，发现清道夫受体CD163在TAM中有很大一部分（50％-86％）表达，且患者之间差异很大。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163 我们建议将CD68与细胞膜标记物（例如CD14，CD163或CD206）一起标记。在流式细胞仪中，由于某些TAM不表达CD14，因此发现CD14和HLA-DR的常用组合不是最佳的。取而代之的是，将CD68和HLA-DR结合染色最好用于所有TAM。关于巨噬细胞表型标记，发现清道夫受体CD163在TAM中有很大一部分（50％-86％）表达，且患者之间差异很大。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163 由于某些TAM不表达CD14，因此发现CD14和HLA-DR的常用组合不是最佳的。取而代之的是，将CD68和HLA-DR结合染色最好用于所有TAM。关于巨噬细胞表型标记，发现清道夫受体CD163在TAM中有很大一部分（50％-86％）表达，且患者之间差异很大。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163 由于某些TAM不表达CD14，因此发现CD14和HLA-DR的常用组合不是最佳的。取而代之的是，将CD68和HLA-DR结合染色最好用于所有TAM。关于巨噬细胞表型标记，发现清道夫受体CD163在TAM中有很大一部分（50％-86％）表达，且患者之间差异很大。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163 发现清道夫受体CD163在大部分患者之间差异很大的TAM中表达（50％-86％）。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163 发现清道夫受体CD163在大部分患者之间差异很大的TAM中表达（50％-86％）。大约50％的TAM对CD206呈阳性。令人惊讶的是，CD163和CD206阳性之间没有明显的重叠，并且在NSCLC肿瘤中鉴定出三个不同的TAM亚群：CD163⁺ CD206 ⁺，CD163 ⁺ CD206 ^-和CD163 ^- CD206 ^-。这项工作应有助于开发基于巨噬细胞的癌症预后工具。