Semen cryopreservation is an increasingly demanded technique in canids, particularly in order to preserve and spread high genetic value material. Sperm vitrification may represent an interesting alternative to costly and time consuming conventional freezing. The objective of this study was to evaluate the effect of sperm vitrification on sperm morphometry and ultrastructure compared to conventional freezing. Pools of nine beagle dogs were both frozen and vitrified. Computerized morphological parameters (length, wide, area and perimeter) and sperm ultrastructure, using scanning and transmission microscopy, were analysed in both fresh and in thawed/warmed samples. There were no differences (p > 0.05) between post-thaw and fresh morphometric variables of the sperm heads. However, cluster analysis revealed that sperm-heads turned out to be smaller after thawing (p < 0.05) in two of the four subpopulations. Vitrification-warming process led to an overall increase in sperm-head size. Furthermore, the sperm head size increased after warming in two subpopulations (p < 0.05). In conclusion, the variations in the sperm head area depended on the cryopreservation procedure (conventional freezing or vitrification). Conventional freezing tended to decrease the head dimensions, at least in some subpopulations, and vitrification led to an overall increase in the sperm head size. Decondensation of chromatin and plasma membrane blebbing in the head region was observed by transmission electron microscopy in several vitrified sperm, which might explain the increase of head dimensions detected by CASA-Morph system.

中文翻译：

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冷冻保存对犬精子形态测量变量和超微结构的影响：玻璃化冷冻与常规冷冻的比较

精液冷冻保存是犬科动物越来越需要的技术，特别是为了保存和传播高遗传价值材料。精子玻璃化冷冻可能是昂贵且耗时的传统冷冻的一种有趣的替代方法。本研究的目的是评估与传统冷冻相比，精子玻璃化冷冻对精子形态测定和超微结构的影响。九只小猎犬池被冷冻和玻璃化。使用扫描和透射显微镜对新鲜和解冻/加热样品中的计算机形态参数（长度、宽度、面积和周长）和精子超微结构进行分析。精子头部的解冻后和新鲜形态测量变量之间没有差异 (p > 0.05)。然而，聚类分析显示，四个亚群中的两个在解冻后精子头变小 (p < 0.05)。玻璃化加热过程导致精子头大小的整体增加。此外，在两个亚群中加热后精子头部大小增加（p < 0.05）。总之，精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。0.05) 在四个亚群中的两个亚群中。玻璃化加热过程导致精子头大小的整体增加。此外，在两个亚群中加热后精子头部大小增加（p < 0.05）。总之，精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。0.05) 在四个亚群中的两个中。玻璃化加热过程导致精子头大小的整体增加。此外，在两个亚群中加热后精子头部大小增加（p < 0.05）。总之，精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。玻璃化加热过程导致精子头大小的整体增加。此外，在两个亚群中加热后精子头部大小增加（p < 0.05）。总之，精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。玻璃化加热过程导致精子头大小的整体增加。此外，在两个亚群中加热后精子头部大小增加（p < 0.05）。总之，精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。精子头部区域的变化取决于冷冻保存程序（常规冷冻或玻璃化）。传统冷冻倾向于减小头部尺寸，至少在某些亚群中，玻璃化冷冻导致精子头部尺寸整体增加。通过透射电子显微镜观察到几个玻璃化精子的头部区域染色质和质膜起泡的去凝聚，这可能解释了 CASA-Morph 系统检测到的头部尺寸的增加。