AIMS The activation of hepatic stellate cells (HSCs) plays a central role in liver fibrosis progression. Phospholipase D (PLD) enzymes participate in multiple cellular activities. However, whether and how PLD regulates HSCs activation remain elusive. MAIN METHODS The expression of intrahepatic PLD1 and PLD2 was determined in CCl4-induced mouse liver fibrosis models by western blot and immunohistochemistry. Cell model of liver fibrogenesis was constructed using rat HSCs line (HSC-T6) treated with recombinant transforming growth factor β1 (TGFβ1). Fibrogenesis was evaluated on the aspects of proliferation, expression of pro-fibrogenic markers and migration. The effects mediated by PLD1-mTOR axis on TGFβ1-induced fibrogenesis were evaluated using HSC-T6 treated with small-molecular PLD1 inhibitors, PLD1-SiRNA, rapamycin (mTOR inhibitor) and MHY1485 (mTOR activator). KEY FINDINGS Significant increase of PLD1, not PLD2 was documented in CCl4-induced cirrhotic compared to normal liver tissues. Suppression of PLD1 activities by PLD inhibitors or down-regulation of PLD1 expression in HSC-T6 could significantly restrain TGFβ1-induced fibrogenesis, as reflected by decreased cell proliferation and reduced expression of pro-fibrogenic markers. Besides, either PLD1 inhibitor or PLD1-SiRNA significantly inhibited mTOR activity of HSC-T6. Moreover, PLD1 inhibitors not only exhibited similar effects with rapamycin in TGFβ1-induced fibrogenesis, but also blunted MHY1485 enhanced cell proliferation of HSC-T6. SIGNIFICANCE The PLD1-mTOR axis of HSCs could be therapeutically targeted in advanced liver fibrosis.

中文翻译：

---

磷脂酶D1-mTOR轴在肝纤维化中的体外作用。

目的肝星状细胞（HSC）的激活在肝纤维化进程中起着核心作用。磷脂酶D（PLD）酶参与多种细胞活动。但是，PLD是否以及如何调节HSC的激活仍不清楚。主要方法通过免疫印迹和免疫组织化学方法，在CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型中测定肝内PLD1和PLD2的表达。使用重组转化生长因子β1（TGFβ1）处理的大鼠HSCs系（HSC-T6）构建肝纤维化的细胞模型。在增殖，促成纤维细胞标志物的表达和迁移方面评估了纤维发生。使用经小分子PLD1抑制剂PLD1-SiRNA处理的HSC-T6，评估了PLD1-mTOR轴介导的TGFβ1诱导的纤维形成的作用。雷帕霉素（mTOR抑制剂）和MHY1485（mTOR激活剂）。主要发现与CCl4引起的肝硬化相比，正常肝组织中PLD1显着增加，而PLD2没有显着增加。PLD抑制剂抑制PLD1活性或HSC-T6中PLD1表达下调可显着抑制TGFβ1诱导的纤维化，这表现为细胞增殖减少和促纤维化标志物表达降低。此外，无论是PLD1抑制剂还是PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSCs的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。主要发现与CCl4引起的肝硬化相比，正常肝组织中PLD1显着增加，而PLD2未见明显增加。PLD抑制剂抑制PLD1活性或HSC-T6中PLD1表达下调可显着抑制TGFβ1诱导的纤维化，这表现为细胞增殖减少和促纤维化标志物表达降低。此外，无论是PLD1抑制剂还是PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSCs的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。主要发现与CCl4引起的肝硬化相比，正常肝组织中PLD1显着增加，而PLD2没有显着增加。PLD抑制剂抑制PLD1活性或HSC-T6中PLD1表达下调可显着抑制TGFβ1诱导的纤维化，这表现为细胞增殖减少和促纤维化标志物表达降低。此外，无论是PLD1抑制剂还是PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSCs的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。PLD抑制剂抑制PLD1活性或HSC-T6中PLD1表达下调可显着抑制TGFβ1诱导的纤维化，这表现为细胞增殖减少和促纤维化标志物表达降低。此外，无论是PLD1抑制剂还是PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSCs的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。PLD抑制剂抑制PLD1活性或HSC-T6中PLD1表达下调可显着抑制TGFβ1诱导的纤维化，这表现为细胞增殖减少和促纤维化标志物表达降低。此外，无论是PLD1抑制剂还是PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSCs的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。PLD1抑制剂或PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSCs的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。PLD1抑制剂或PLD1-SiRNA均可显着抑制HSC-T6的mTOR活性。此外，PLD1抑制剂不仅在雷帕霉素的TGFβ1诱导的纤维形成中表现出相似的作用，而且钝化的MHY1485增强了HSC-T6的细胞增殖。意义HSC的PLD1-mTOR轴可作为晚期肝纤维化的治疗靶标。