Motor neuron disease (MND) is a kind of common clinical nervous system disease with typical characteristic of progressive motor neurons degeneration or death. Motor neuron derived from stem cells or motor neuron progenitor cells will be a good choice to be used for treatment of the disease. In this study, we used the combination of 5 small molecular including CHIR99021 (CHIR), SB431542 (SB), DMH1 (DMH), retinoic acid (RA) and Purmorphamine (Pur) to induce hair follicles neural crest stem cells (hfNCSCs) to motor neurons progenitors (MNPs). Valproic acid (VPA) was used to make MNPs proliferation. RA and Pur were used to try to induce MNPs toward motor neurons (MNs) and CpdE was tried for MNs maturation. Nestin, β-tubulin Ш (Tuj1), microtubule associated protein 2 (MAP2), Olig2, choline acetyltransferase (ChAT)and TUBB3 were examined at protein and mRNA levels by immunofluoresence cytochemistry, western blot and real time PCR at 6, 16 and 22 days. Our data showed cells changed into bipolar or multipolar shape forming the cell clusters like scattered rosettes. Nestin expression decreased significantly at 22 days. Compared to 6 days, percentage of Olig2 + MNPs was higher, (88.53 ± 6.67)%, and Olig2 expression at protein and gene level was lower at 22 days. Percentage of MAP2 positive cells increased to (90.62 ± 2.31) % and ChAT positive cells increased to (83.29 ± 6.62) % at 22 days. It indicates that these 5 molecular can differentiate hfNCSCs into Olig2 positive cells with a unipotent differentiation toward motor neurons.

中文翻译：

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大鼠毛囊神经嵴干细胞来源的Olig2阳性细胞

运动神经元病（MND）是一种临床常见的神经系统疾病，具有进行性运动神经元变性或死亡的典型特征。源自干细胞或运动神经元祖细胞的运动神经元将是用于治疗该疾病的不错选择。在本研究中，我们使用 CHIR99021 (CHIR)、SB431542 (SB)、DMH1 (DMH)、视黄酸 (RA) 和 Purmorphamine (Pur) 等 5 个小分子的组合来诱导毛囊神经嵴干细胞 (hfNCSCs)运动神经元祖细胞 (MNP)。丙戊酸 (VPA) 用于使 MNPs 增殖。RA 和 Pur 被用来试图诱导 MNPs 向运动神经元 (MNs) 和 CpdE 被尝试用于 MNs 成熟。巢蛋白、β-微管蛋白 Ш (Tuj1)、微管相关蛋白 2 (MAP2)、Olig2、在第 6、16 和 22 天通过免疫荧光细胞化学、蛋白质印迹和实时 PCR 在蛋白质和 mRNA 水平检查胆碱乙酰转移酶 (ChAT) 和 TUBB3。我们的数据显示细胞变成双极或多极形状，形成像分散的玫瑰花结一样的细胞簇。巢蛋白表达在 22 天时显着下降。与第 6 天相比，Olig2 + MNP 的百分比更高，(88.53 ± 6.67)%，并且 Olig2 在蛋白质和基因水平上的表达在 22 天时更低。在第 22 天，MAP2 阳性细胞的百分比增加到 (90.62 ± 2.31) %，ChAT 阳性细胞增加到 (83.29 ± 6.62) %。这表明这 5 个分子可以将 hfNCSCs 分化为 Olig2 阳性细胞，并具有向运动神经元的单能分化。我们的数据显示细胞变成双极或多极形状，形成像分散的玫瑰花结一样的细胞簇。巢蛋白表达在 22 天时显着下降。与第 6 天相比，Olig2 + MNP 的百分比更高，(88.53 ± 6.67)%，并且 Olig2 在蛋白质和基因水平上的表达在 22 天时更低。在第 22 天，MAP2 阳性细胞的百分比增加到 (90.62 ± 2.31) %，ChAT 阳性细胞增加到 (83.29 ± 6.62) %。这表明这 5 个分子可以将 hfNCSCs 分化为 Olig2 阳性细胞，并具有向运动神经元的单能分化。我们的数据显示细胞变成双极或多极形状，形成像分散的玫瑰花结一样的细胞簇。巢蛋白表达在 22 天时显着下降。与第 6 天相比，Olig2 + MNP 的百分比更高，(88.53 ± 6.67)%，并且 Olig2 在蛋白质和基因水平上的表达在 22 天时更低。在第 22 天，MAP2 阳性细胞的百分比增加到 (90.62 ± 2.31) %，ChAT 阳性细胞增加到 (83.29 ± 6.62) %。这表明这 5 个分子可以将 hfNCSCs 分化为 Olig2 阳性细胞，并具有向运动神经元的单能分化。和 Olig2 在蛋白质和基因水平上的表达在 22 天时较低。在第 22 天，MAP2 阳性细胞的百分比增加到 (90.62 ± 2.31) %，ChAT 阳性细胞增加到 (83.29 ± 6.62) %。这表明这 5 个分子可以将 hfNCSCs 分化为 Olig2 阳性细胞，并具有向运动神经元的单能分化。和 Olig2 在蛋白质和基因水平上的表达在 22 天时较低。在第 22 天，MAP2 阳性细胞的百分比增加到 (90.62 ± 2.31) %，ChAT 阳性细胞增加到 (83.29 ± 6.62) %。这表明这 5 个分子可以将 hfNCSCs 分化为 Olig2 阳性细胞，并具有向运动神经元的单能分化。