Receptor‐like kinases (RLK) and receptor‐like proteins (RLP) often interact in a combinatorial manner depending on tissue identity, membrane domains, or endo‐ and exogenous cues, and the same RLKs or RLPs can generate different signaling outputs depending on the composition of the receptor complexes they are involved in. Investigation of their interaction partners in a spatial and dynamic way is therefore of prime interest to understand their functions. This is, however, limited by the technical complexity of assessing it in endogenous conditions. A solution to close this gap is to determine protein interaction directly in the relevant tissues at endogenous expression levels using Förster resonance energy transfer (FRET). The ideal fluorophore pair for FRET must, however, fulfil specific requirements: (a) The emission and excitation spectra of the donor and acceptor, respectively, must overlap; (b) they should not interfere with proper folding, activity, or localization of the fusion proteins; (c) they should be sufficiently photostable in plant cells. Furthermore, the donor must yield sufficient photon counts at near‐endogenous protein expression levels. Although many fluorescent proteins were reported to be suitable for FRET experiments, only a handful were already described for applications in plants. Herein, we compare a range of fluorophores, assess their usability to study RLK interactions by FRET‐based fluorescence lifetime imaging (FLIM) and explore their differences in FRET efficiency. Our analysis will help to select the optimal fluorophore pair for diverse FRET applications.

中文翻译：

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彩虹之上：植物FRET实验中荧光蛋白选择的实用指南。

受体样激酶（RLK）和受体样蛋白（RLP）通常以组合方式相互作用，具体取决于组织的身份，膜结构域或内源和外源线索，而相同的RLK或RLP可以根据信号强度产生不同的信号输出。他们参与的受体复合物的组成。因此，以空间和动态方式研究其相互作用伴侣对于了解其功能至关重要。但是，这受到在内源条件下评估它的技术复杂性的限制。解决此问题的一种方法是使用Förster共振能量转移（FRET）在内源性表达水平直接确定相关组织中的蛋白质相互作用。但是，用于FRET的理想荧光团对必须满足以下特定要求：（a）供体和受体的发射光谱和激发光谱必须分别重叠；（b）它们不应干扰融合蛋白的正确折叠，活性或定位；（c）它们在植物细胞中应具有足够的光稳定性。此外，供体必须在接近内源的蛋白质表达水平上产生足够的光子计数。尽管据报道许多荧光蛋白适用于FRET实验，但仅描述了少数几种在植物中的应用。在此，我们比较了一系列荧光团，通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估了它们用于研究RLK相互作用的可用性，并探讨了它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。（b）它们不应干扰融合蛋白的正确折叠，活性或定位；（c）它们在植物细胞中应具有足够的光稳定性。此外，供体必须在接近内源的蛋白质表达水平上产生足够的光子计数。尽管据报道许多荧光蛋白适用于FRET实验，但仅描述了少数几种在植物中的应用。在此，我们比较了一系列荧光团，通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估了它们用于研究RLK相互作用的可用性，并探讨了它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。（b）它们不应干扰融合蛋白的正确折叠，活性或定位；（c）它们在植物细胞中应具有足够的光稳定性。此外，供体必须在接近内源的蛋白质表达水平上产生足够的光子计数。尽管据报道许多荧光蛋白适用于FRET实验，但仅描述了少数几种在植物中的应用。本文中，我们比较了一系列荧光团，通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估了它们用于研究RLK相互作用的可用性，并探讨了它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。此外，供体必须在接近内源的蛋白质表达水平上产生足够的光子计数。尽管据报道许多荧光蛋白适用于FRET实验，但仅描述了少数几种在植物中的应用。本文中，我们比较了一系列荧光团，通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估了它们用于研究RLK相互作用的可用性，并探讨了它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。此外，供体必须在接近内源的蛋白质表达水平上产生足够的光子计数。尽管据报道许多荧光蛋白适用于FRET实验，但仅描述了少数几种在植物中的应用。在此，我们比较了一系列荧光团，通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估了它们用于研究RLK相互作用的可用性，并探讨了它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估其研究RLK相互作用的可用性，并探讨它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。通过基于FRET的荧光寿命成像（FLIM）评估其研究RLK相互作用的可用性，并探讨它们在FRET效率上的差异。我们的分析将有助于为各种FRET应用选择最佳的荧光团对。