Autophagy plays a role in several human diseases, but each of the current methods to measure autophagy has significant drawbacks. ATG5 and ATG16L1 are regulators necessary for autophagy; therefore, drugs that inhibit the interaction of these proteins may be therapeutically useful. To evaluate the interaction of ATG5 and ATG16L1 in cells, their cDNAs were fused to the coding sequences of SmBIT and LgBIT, two components of NanoLuc luciferase. This generated a luminescent signal when SmBIT and LgBIT interacted to form a functional luciferase as a result of their colocalization that was brought about by the binding of ATG5 and ATG16L1. The assay measures the interaction in real time and can be used in microplate format to allow for multiple experimental conditions to be assessed. The interaction of ATG5 and ATG16L1 is not significantly altered by inhibition of lysosomal function, or inhibitors of Ulk1, Vps34 or mTORC1. However, there was a constitutive interaction of ATG5 and ATG16L1 and luminescence was stimulated within 3 min, by up to 500%, when the cells were deprived of nutrients. When the nutrients are returned, the complex returns to its basal status equally rapidly. Sphingosine‐1‐phosphate and CYM‐5541 partially repressed the effects of nutrient starvation. Furthermore, we identified a small‐molecule inhibitor that interferes with the interaction of ATG5 and ATG16L1 in cells. This assay provides a novel tool for researchers to measure autophagy and can be potentially applied to many cell types.

中文翻译：

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使用NanoLuc Binary Technology（NanoBIT）测量营养剥夺后，ATG5-ATG16L1复合物的快速变化。

自噬在几种人类疾病中起作用，但是目前每种测量自噬的方法都有明显的缺陷。ATG5和ATG16L1是自噬必不可少的调节器。因此，抑制这些蛋白质相互作用的药物可能在治疗上有用。为了评估ATG5和ATG16L1在细胞中的相互作用，将它们的cDNA与SnBIT和LgBIT的编码序列融合，这是NanoLuc荧光素酶的两个组成部分。当SmBIT和LgBIT相互作用形成功能性萤光素酶时，由于ATG5和ATG16L1的结合而引起的共定位，从而产生发光信号。该测定法实时测量相互作用，并且可以微孔板形式使用以允许评估多种实验条件。通过抑制溶酶体功能或Ulk1，Vps34或mTORC1的抑制剂，ATG5和ATG16L1的相互作用不会显着改变。然而，当细胞缺乏营养时，ATG5和ATG16L1之间存在本构相互作用，并且在3分钟内激发了高达500％的发光。当营养物返回时，复合物同样迅速地恢复其基础状态。鞘氨醇-1-磷酸和CYM-5541部分抑制了营养饥饿的影响。此外，我们鉴定了一种干扰细胞中ATG5和ATG16L1相互作用的小分子抑制剂。该测定法为研究人员测量自噬提供了一种新颖的工具，可潜在地应用于许多细胞类型。当细胞缺乏营养时，ATG5和ATG16L1发生本构相互作用，并在3分钟内激发发光，最高可达500％。当营养物返回时，复合物同样迅速地恢复其基础状态。鞘氨醇-1-磷酸和CYM-5541部分抑制了营养饥饿的影响。此外，我们鉴定了一种干扰细胞中ATG5和ATG16L1相互作用的小分子抑制剂。该测定法为研究人员测量自噬提供了一种新颖的工具，可以潜在地应用于许多细胞类型。当细胞缺乏营养时，ATG5和ATG16L1发生本构相互作用，并在3分钟内激发发光，最高可达500％。当营养返回时，复合物同样迅速地恢复其基础状态。鞘氨醇-1-磷酸和CYM-5541部分抑制了营养饥饿的影响。此外，我们鉴定了一种干扰细胞中ATG5和ATG16L1相互作用的小分子抑制剂。该测定法为研究人员测量自噬提供了一种新颖的工具，可以潜在地应用于许多细胞类型。鞘氨醇-1-磷酸和CYM-5541部分抑制了营养饥饿的影响。此外，我们鉴定了一种干扰细胞中ATG5和ATG16L1相互作用的小分子抑制剂。该测定法为研究人员测量自噬提供了一种新颖的工具，可潜在地应用于许多细胞类型。鞘氨醇-1-磷酸和CYM-5541部分抑制了营养饥饿的影响。此外，我们鉴定了一种干扰细胞中ATG5和ATG16L1相互作用的小分子抑制剂。该测定法为研究人员测量自噬提供了一种新颖的工具，可潜在地应用于许多细胞类型。