Heat-induced antigen retrieval (HIAR) treatment improves the antigen immunodetection in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue samples and it can also improve the detection of intracellular antigens in alcohol-fixed cytological samples, although it could deleteriously impact immunodetection, particularly that of membranous antigens. We examined the differences in cell surface topography on MCF7 cells fixed in methanol/acetone (M/A) or 4% paraformaldehyde (4% PFA), as well as the changes caused by HIAR treatment at three different temperatures (60, 90, and 120°C), using atomic force microscopy. Furthermore, the consequences for immunostaining of five membranous antigens [epidermal growth factor receptor (EGFR), E-cadherin, CD9, CD24, and CD44] were examined. Our results illustrate that while there was no one single optimal immunostaining condition for the tested antibodies, the surface topography could be an important factor in successful staining. Generally, the best conditions for successful immunostaining were M/A fixation with no HIAR treatment, whereas in 4% PFA-fixed cells, HIAR treatment at 120°C was optimal. These conditions showed similarity in cell surface skewness. A correlation factor between successful immunocytochemical staining and the skewness parameter was 0.8000. Our results indicate that the presence of valleys, depressions, scratches, and pits on the cell surface is unfavorable for the successful immunodetection of cell surface antigens.

中文翻译：

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细胞膜纳米结构因热诱导抗原修复而改变：膜抗原免疫细胞化学检测的可能结果

热诱导抗原修复 (HIAR) 治疗可改善福尔马林固定、石蜡包埋的组织样品中的抗原免疫检测，还可以改善酒精固定的细胞学样品中细胞内抗原的检测，尽管它可能会对免疫检测产生不利影响，尤其是膜抗原。我们检查了固定在甲醇/丙酮 (M/A) 或 4% 多聚甲醛 (4% PFA) 中的 MCF7 细胞的细胞表面形貌差异，以及在三种不同温度（60、90 和120°C），使用原子力显微镜。此外，还检查了五种膜抗原[表皮生长因子受体 (EGFR)、E-钙粘蛋白、CD9、CD24 和 CD44] 的免疫染色结果。我们的结果表明，虽然对于测试的抗体没有单一的最佳免疫染色条件，但表面形貌可能是成功染色的一个重要因素。一般来说，成功免疫染色的最佳条件是 M/A 固定而不进行 HIAR 处理，而在 4% PFA 固定的细胞中，120°C 的 HIAR 处理是最佳的。这些条件显示出细胞表面偏度的相似性。成功的免疫细胞化学染色与偏度参数之间的相关因子为 0.8000。我们的结果表明，细胞表面存在的山谷、凹陷、划痕和凹坑不利于细胞表面抗原的成功免疫检测。成功免疫染色的最佳条件是 M/A 固定而不进行 HIAR 处理，而在 4% PFA 固定的细胞中，120°C 的 HIAR 处理是最佳的。这些条件显示出细胞表面偏度的相似性。成功的免疫细胞化学染色与偏度参数之间的相关因子为 0.8000。我们的结果表明，细胞表面存在的山谷、凹陷、划痕和凹坑不利于细胞表面抗原的成功免疫检测。成功免疫染色的最佳条件是 M/A 固定而不进行 HIAR 处理，而在 4% PFA 固定的细胞中，120°C 的 HIAR 处理是最佳的。这些条件显示出细胞表面偏度的相似性。成功的免疫细胞化学染色与偏度参数之间的相关因子为 0.8000。我们的结果表明，细胞表面存在的山谷、凹陷、划痕和凹坑不利于细胞表面抗原的成功免疫检测。