The neuronal ceroid lipofuscinoses (NCLs) are a family of neurodegenerative diseases that affect people of all ages and ethnicities, yet many of the associated genes/proteins are not well characterized. Mutations in MFSD8 (major facilitator superfamily domain-containing 8) cause an infantile form of NCL referred to as CLN7 disease. In this study, we revealed the localization and binding partners of an ortholog of human MFSD8 (Mfsd8) in the social amoeba Dictyostelium discoideum. Putative lysosomal targeting motifs are conserved in Dictyostelium Mfsd8, as are several residues mutated in CLN7 disease patients. Mfsd8 tagged with GFP localizes to endocytic compartments, which includes acidic intracellular vesicles and late endosomes. We pulled-down GFP-Mfsd8 and used mass spectrometry to reveal the Mfsd8 interactome during Dictyostelium growth and starvation. Among the identified hits were the Dictyostelium ortholog of human cathepsin D (CtsD), as well as proteins linked to the functions of the CLN3 (Cln3) and CLN5 (Cln5) orthologs in Dictyostelium. To study the function of Mfsd8, we validated a publically available mfsd8- cell line (GWDI Project) and then used this knockout cell line to show that Mfsd8 influences the secretion of Cln5 and CtsD. This information is then integrated into an emerging model describing the molecular networking of NCL proteins in Dictyostelium. In total, this study identifies Dictyostelium as a new model system for studying CLN7 disease.

中文翻译：

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Mfsd8 定位于内吞区室并影响网基网柄菌中 Cln5 和组织蛋白酶 D 的分泌。

神经元蜡样脂褐质沉积症 (NCL) 是一个影响所有年龄和种族的神经退行性疾病家族，但许多相关的基因/蛋白质尚未得到很好的表征。MFSD8（包含主要促进子超家族结构域 8）中的突变导致称为 CLN7 疾病的婴儿型 NCL。在这项研究中，我们揭示了社会变形虫盘基网柄菌中人类 MFSD8 (Mfsd8) 直向同源物的定位和结合伙伴。假定的溶酶体靶向基序在网基网柄菌 Mfsd8 中是保守的，在 CLN7 疾病患者中突变的几个残基也是如此。用 GFP 标记的 Mfsd8 定位于内吞隔室，包括酸性细胞内囊泡和晚期内体。我们拉下 GFP-Mfsd8 并使用质谱法来揭示网基网柄菌生长和饥饿期间的 Mfsd8 相互作用组。在确定的命中中，有人类组织蛋白酶 D (CtsD) 的网基网柄菌直向同源物，以及与网基网柄菌中 CLN3 (Cln3) 和 CLN5 (Cln5) 直向同源物的功能相关的蛋白质。为了研究 Mfsd8 的功能，我们验证了一个公开可用的 mfsd8-细胞系（GWDI 项目），然后使用该基因敲除细胞系来证明 Mfsd8 影响 Cln5 和 CtsD 的分泌。然后将这些信息整合到一个新兴模型中，该模型描述了网基网柄菌中 NCL 蛋白的分子网络。总的来说，这项研究将网基网柄菌确定为研究 CLN7 疾病的新模型系统。以及与网基网柄菌中 CLN3 (Cln3) 和 CLN5 (Cln5) 直向同源物的功能相关的蛋白质。为了研究 Mfsd8 的功能，我们验证了一个公开可用的 mfsd8-细胞系（GWDI 项目），然后使用该基因敲除细胞系来证明 Mfsd8 影响 Cln5 和 CtsD 的分泌。然后将这些信息整合到一个新兴模型中，该模型描述了网基网柄菌中 NCL 蛋白的分子网络。总的来说，这项研究将网基网柄菌确定为研究 CLN7 疾病的新模型系统。以及与网基网柄菌中 CLN3 (Cln3) 和 CLN5 (Cln5) 直向同源物的功能相关的蛋白质。为了研究 Mfsd8 的功能，我们验证了一个公开可用的 mfsd8-细胞系（GWDI 项目），然后使用该基因敲除细胞系来证明 Mfsd8 影响 Cln5 和 CtsD 的分泌。然后将这些信息整合到一个新兴模型中，该模型描述了网基网柄菌中 NCL 蛋白的分子网络。总的来说，这项研究将网基网柄菌确定为研究 CLN7 疾病的新模型系统。然后将这些信息整合到一个新兴模型中，该模型描述了网基网柄菌中 NCL 蛋白的分子网络。总的来说，这项研究将网基网柄菌确定为研究 CLN7 疾病的新模型系统。然后将这些信息整合到一个新兴模型中，该模型描述了网基网柄菌中 NCL 蛋白的分子网络。总的来说，这项研究将网基网柄菌确定为研究 CLN7 疾病的新模型系统。