Bone marrow WT1 mRNA levels assessed by the ELN method are useful to establish prognostic correlations in myeloid malignancies treated with chemotherapy or hematopoietic stem cell transplantation (HCT). Those patients with WT1 levels below ten copies have a good outcome. However, some of these patients relapse. To further characterize this group of cases, we applied a new and sensitive digital (ddPCR) WT1 method. A consecutive series of 49 patients with treated myeloid malignancies and with an ELN WT1 quantitation of < 10 copies were included in the study. All cases (47 AML and 2 MDS) have received intensive chemotherapy or HCT. One to four micrograms of total RNA were retrotranscribed to obtain ≥ 10,000 ABL1 copies using the ELN protocol. Only those cases with a good quality cDNA were used in the ddPCR WT1 test. The ddPCR Gene Expression WT1 Assay of Bio-Rad© was used to perform the PCR amplification, and the microdroplets were quantified in the Bio-Rad's QX200 droplet reader. Eighteen patients showed a negative WT1 ddPCR assay (0 copies/μl), whereas 31 cases were positive (results ranged from 1 to 15.2 copies/μl). Survival analysis showed statistically significant differences in terms of OS between both groups, 83 ± 8% vs. 46 ± 9% (p = 0.024). A statistically significant correlation was also found between ddPCRWT1 results and CD123+ cell number detected by flow cytometry (p = 0.024). Larger series of patients tested with the current ddPCRWT1 method will solve whether it could be used to stratify patients with myeloid malignancies achieving deep WT1 molecular response (< 10 copies).

中文翻译：

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WT1的数字PCR方法在CR和深层ELN WT1分子应答（<10份）中的骨髓瘤中的应用。

通过ELN方法评估的骨髓WT1 mRNA水平可用于建立化学疗法或造血干细胞移植（HCT）治疗的骨髓恶性肿瘤的预后相关性。那些WT1水平低于十个拷贝的患者具有良好的结果。但是，其中一些患者会复发。为了进一步表征这组病例，我们应用了一种新的敏感数字（ddPCR）WT1方法。该研究包括了连续的49例经过治疗的髓样恶性肿瘤患者，其ELN WT1定量<10份。所有病例（47例AML和2例MDS）均接受了强化化疗或HCT。使用ELN协议，对1至4微克总RNA进行逆转录，以获得≥10,000个ABL1拷贝。ddPCR WT1测试仅使用那些具有高质量cDNA的情况。使用Bio-Rad©的ddPCR基因表达WT1分析进行PCR扩增，并在Bio-Rad的QX200液滴读取器中对微滴进行定量。18例患者的WT1 ddPCR检测结果为阴性（0拷贝/μl），而31例为阳性（结果为1至15.2拷贝/μl）。生存分析显示两组的OS差异有统计学意义，分别为83±8％和46±9％（p = 0.024）。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数量之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的更大系列患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。然后在Bio-Rad的QX200液滴读取器中对微滴进行定量。18例患者的WT1 ddPCR检测结果为阴性（0拷贝/μl），而31例为阳性（结果为1至15.2拷贝/μl）。生存分析显示两组的OS差异有统计学意义，分别为83±8％和46±9％（p = 0.024）。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的更大系列患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。然后在Bio-Rad的QX200液滴读取器中对微滴进行定量。18例患者的WT1 ddPCR检测结果为阴性（0拷贝/μl），而31例为阳性（结果为1至15.2拷贝/μl）。生存分析显示两组的OS差异有统计学意义，分别为83±8％和46±9％（p = 0.024）。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数量之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的更大系列患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。而31例为阳性（结果范围为1至15.2拷贝/μl）。生存分析显示两组的OS差异有统计学意义，分别为83±8％和46±9％（p = 0.024）。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数量之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的大批患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。而31例为阳性（结果范围为1至15.2拷贝/μl）。生存分析显示两组的OS差异有统计学意义，分别为83±8％和46±9％（p = 0.024）。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数量之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的更大系列患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的更大系列患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。在ddPCRWT1结果与流式细胞仪检测到的CD123 +细胞数量之间也发现了统计学上显着的相关性（p = 0.024）。使用目前的ddPCRWT1方法测试的更大系列患者将解决是否可以将其用于实现深WT1分子应答（<10份）的髓样恶性肿瘤患者的分层。