Paracetamol (acetaminophen, APAP) is the most frequently used analgesic drug worldwide. However, patients in several specific populations can have an increased exposure to toxic APAP metabolites. Therefore, APAP-protein adducts have been proposed as an alternative marker for the assessment of APAP intoxications and as an effective tool to study and steer APAP treatment in patients with an increased risk of APAP-induced liver damage. These adducts have been determined in plasma or serum as a matrix. Blood microsampling allows the determination of a variety of analytes, including protein adducts, in a drop of blood, facilitating convenient follow-up of patients in a home-sampling context, as well as repeated sampling of pediatric patients. We therefore evaluated the use of blood-based volumetric microsamples for the quantification of APAP-protein adducts. Quantitative methods for the determination of APAP-protein adducts in dried blood and dried plasma volumetric absorptive microsamples were developed and validated. Also a preliminary evaluation of pediatric patient dried blood microsamples was conducted. Method validation encompassed the evaluation of selectivity, carry over, calibration model, accuracy and precision, matrix effect, recovery and the effect of the Hct on the recovery, dilution integrity, and stability. All pre-set acceptance criteria were met, except for stability. Spiking of blank blood with APAP revealed a concentration-dependent ex vivo formation of APAP-protein adducts, resulting in a response for the measurand APAP-Cys, with an apparent role for the red blood cell fraction. Analysis of authentic samples, following intake of APAP at therapeutic dosing, revealed much higher APAP-Cys concentrations in dried blood vs. dried plasma samples, making interpretation of the results in the context of published intervals difficult. In addition, in contrast to what was observed during method validation, the data obtained for the patient samples showed a high and unacceptable variation. We conclude that, for a combination of reasons, dried blood is not a suitable matrix for the quantification of APAP-protein adducts via the measurement of the APAP-Cys digestion product. The collection of plasma or serum, either in the form of a liquid sample or a dried microsample for this purpose is advised.

中文翻译：

---

干血微量样品：适合作为对乙酰氨基酚-蛋白质加合物定量的替代基质吗？

扑热息痛（对乙酰氨基酚，APAP）是全世界最常用的镇痛药。然而，几个特定人群中的患者可能会更多地接触有毒的 APAP 代谢物。因此，APAP 蛋白加合物已被提议作为评估 APAP 中毒的替代标志物，并作为研究和指导 APAP 治疗的有效工具，用于 APAP 诱导的肝损伤风险增加的患者。这些加合物已在血浆或血清中作为基质进行测定。血液微量采样可以测定一滴血中的各种分析物，包括蛋白质加合物，便于在家庭采样环境中方便地对患者进行随访，以及对儿科患者进行重复采样。因此，我们评估了使用基于血液的体积微量样品对 APAP 蛋白加合物进行定量的情况。开发并验证了用于测定干血和干血浆体积吸收微量样品中 APAP 蛋白加合物的定量方法。还对儿科患者干血微量样本进行了初步评估。方法验证包括对选择性、残留、校准模型、准确度和精密度、基质效应、回收率以及 Hct 对回收率、稀释完整性和稳定性的影响的评估。除了稳定性之外，所有预设的验收标准都得到满足。用 APAP 加标空白血液显示 APAP 蛋白加合物的浓度依赖性离体形成，导致对被测量 APAP-Cys 的响应，对红细胞部分有明显的作用。在以治疗剂量摄入 APAP 后，对真实样本的分析显示，与干血浆样本相比，干血样本中的 APAP-Cys 浓度要高得多，这使得在公布的间隔范围内解释结果变得困难。此外，与方法验证期间观察到的情况相反，从患者样本中获得的数据显示出高且不可接受的变化。我们得出结论，由于多种原因，干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。为此，建议以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。在以治疗剂量摄入 APAP 后，显示干血与干血浆样品中的 APAP-Cys 浓度要高得多，这使得在公布的间隔范围内解释结果变得困难。此外，与方法验证期间观察到的情况相反，从患者样本中获得的数据显示出高且不可接受的变化。我们得出结论，由于多种原因，干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。为此，建议以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。在以治疗剂量摄入 APAP 后，显示干血与干血浆样品中的 APAP-Cys 浓度要高得多，这使得在公布的间隔范围内解释结果变得困难。此外，与方法验证期间观察到的情况相反，从患者样本中获得的数据显示出高且不可接受的变化。我们得出结论，由于多种原因，干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。为此，建议以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。使得在公布的区间范围内解释结果变得困难。此外，与方法验证期间观察到的情况相反，从患者样本中获得的数据显示出高且不可接受的变化。我们得出结论，由于多种原因，干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。建议为此目的以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。使得在公布的区间范围内解释结果变得困难。此外，与方法验证期间观察到的情况相比，从患者样本中获得的数据显示出高且不可接受的变化。我们得出结论，由于多种原因，干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。为此，建议以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。为此，建议以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。干血不是通过测量 APAP-Cys 消化产物来定量 APAP-蛋白质加合物的合适基质。为此，建议以液体样品或干燥的微量样品的形式收集血浆或血清。