In herpes simplex epithelial keratitis, excessive TLR3-induced cellular responses after virus infection evoke inflammatory cascades that might be destructive to the host cornea. Nerve growth factor (NGF), a pluripotent neurotrophic factor with immune regulatory effect, was proved to be effective in Herpes simplex keratitis (HSK) treatment, although the detailed mechanisms remain unclear. This study aims to investigate the effects of NGF on modulating inflammatory responses triggered by TLR3 activation in human corneal epithelial cells (HCECs) in vitro. HCECs were stimulated with TLR3 agonist, poly(I:C), in the absence or presence of NGF. Cell viability and cytotoxicity were measured by a CCK-8 assay and LDH release assay, respectively. The activation of NF-κB signaling pathway was examined using immunofluorescence staining and western blotting. Levels of proinflammatory cytokines were determined by ELISA or RT-qPCR. ROS generation and 8-OHdG positive cells were examined by a fluorometric analysis. It was shown that NGF significantly inhibited the generation of proinflammatory cytokines in HCECs triggered by TLR3 activation (P < 0.05), probably via suppressing NF-κB activation. NGF also impeded the upstream signal to initiate NF-κB activation by scavenging ROS by approximately 50% (P < 0.05). In addition, 8-OHdG positive cells were substantially attenuated by NGF treatment (P < 0.01). Taken together, this study indicates that NGF could inhibit TLR3-induced inflammatory cascades in HCECs, suggesting NGF as a potential therapeutic agent for HSK.

中文翻译：

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神经生长因子抑制人角膜上皮细胞中 TLR3 诱导的炎症级联反应

在单纯疱疹上皮性角膜炎中，病毒感染后过度的 TLR3 诱导的细胞反应会引发炎症级联反应，这可能对宿主角膜造成破坏。神经生长因子 (NGF) 是一种具有免疫调节作用的多能神经营养因子，已被证明可有效治疗单纯疱疹性角膜炎 (HSK)，但具体机制尚不清楚。本研究旨在研究 NGF 在体外调节人角膜上皮细胞 (HCEC) 中 TLR3 激活引发的炎症反应的作用。在 NGF 不存在或存在的情况下，用 TLR3 激动剂 poly(I:C) 刺激 HCEC。分别通过 CCK-8 测定和 LDH 释放测定测量细胞活力和细胞毒性。使用免疫荧光染色和蛋白质印迹检查NF-κB信号通路的激活。通过ELISA或RT-qPCR测定促炎细胞因子的水平。通过荧光分析检查 ROS 产生和 8-OHdG 阳性细胞。结果表明，NGF 显着抑制了由 TLR3 激活触发的 HCECs 中促炎细胞因子的产生（P < 0.05），可能是通过抑制 NF-κB 激活。NGF 还通过清除约 50% 的 ROS 来阻止上游信号启动 NF-κB 活化（P < 0.05）。此外，8-OHdG 阳性细胞通过 NGF 处理显着减毒（P < 0.01）。总之，这项研究表明 NGF 可以抑制 TLR3 诱导的 HCECs 炎症级联反应，表明 NGF 作为 HSK 的潜在治疗剂。通过荧光分析检查 ROS 产生和 8-OHdG 阳性细胞。结果表明，NGF 显着抑制了由 TLR3 激活触发的 HCECs 中促炎细胞因子的产生（P < 0.05），可能是通过抑制 NF-κB 激活。NGF 还通过清除约 50% 的 ROS 来阻止上游信号启动 NF-κB 活化（P < 0.05）。此外，8-OHdG 阳性细胞通过 NGF 处理显着减毒（P < 0.01）。总之，这项研究表明 NGF 可以抑制 TLR3 诱导的 HCECs 炎症级联反应，表明 NGF 作为 HSK 的潜在治疗剂。通过荧光分析检查 ROS 产生和 8-OHdG 阳性细胞。结果表明，NGF 显着抑制了由 TLR3 激活触发的 HCECs 中促炎细胞因子的产生（P < 0.05），可能是通过抑制 NF-κB 激活。NGF 还通过清除约 50% 的 ROS 来阻止上游信号启动 NF-κB 活化（P < 0.05）。此外，8-OHdG 阳性细胞通过 NGF 处理显着减毒（P < 0.01）。总之，这项研究表明 NGF 可以抑制 TLR3 诱导的 HCECs 炎症级联反应，表明 NGF 作为 HSK 的潜在治疗剂。NGF 还通过清除约 50% 的 ROS 来阻止上游信号启动 NF-κB 活化（P < 0.05）。此外，8-OHdG 阳性细胞通过 NGF 处理显着减毒（P < 0.01）。总之，这项研究表明 NGF 可以抑制 TLR3 诱导的 HCECs 炎症级联反应，表明 NGF 作为 HSK 的潜在治疗剂。NGF 还通过清除约 50% 的 ROS 来阻止上游信号启动 NF-κB 活化（P < 0.05）。此外，8-OHdG 阳性细胞通过 NGF 处理显着减毒（P < 0.01）。总之，这项研究表明 NGF 可以抑制 TLR3 诱导的 HCECs 炎症级联反应，表明 NGF 作为 HSK 的潜在治疗剂。