Abstract• Development of clonal propagation method, such as somatic embryogenesis, has numerous applications such as mass-production of genetically improved plants and the amenability of embryogenic cultures to cryogenic storage. Since the 90’s, researchers at INRA have engaged in research on somatic embryogenesis in Larix species (Larix × eurolepis, Larix × marschlinsii).• The aim of this work was to improve and to simplify all steps of somatic embryogenesis and to apply this protocol to the new hybrid variety REVE-VERT.• The somatic embryogenesis initiation frequency from immature zygotic embryos was high (65%) on a medium with reduced plant growth regulator concentrations (2.2 μM of 2.4-dichlorophenoxyacetic acid and 2.3 μM of 6-benzyladenine). Simplified cryopreservation method (no need of programmable freezer) of the embryonal masses resulted in 100% recovery of cryopreserved lines. Maturation of a large number of somatic embryos was greatly improved when embryonal masses were dispersed on filter paper placed on medium containing high concentration of gellan gum (8 g·L−1). Under these conditions, 94% of the lines matured somatic embryos that developed into plantlets. Clearly ageing and cryopreservation did not reduce embryogenic potential of embryonal masses.• Requirements for the effective integration of somatic embryogenesis into the larch breeding programme are discussed.Résumé• Le développement de méthode de multiplication clonale, telle l’embryogenèse somatique, a de nombreuses applications comme la production en masse de plants génétiquement améliorés et la disponibilité des cultures embryogènes en cryoconservation. Depuis les années 1990, l’INRA a engagé des recherches en embryogenèse somatique des mélèzes (Larix × eurolepis, Larix × marschlinsii).• L’objectif du travail a été de simplifier et d’améliorer chaque étape de l’embryogenèse somatique, et d’appliquer ce protocole à la nouvelle variété de mélèze hybride REVE-VERT.• L’initiation de l’embryogenèse somatique à partir d’embryons zygotiques immatures est obtenue à des fréquences élevées (65 %) avec un milieu de culture contenant des concentrations hormonales réduites (2,2 μM d’acide 2.4-dichlorophenoxyacetic et 2,3 μM de 6-benzyladenine). Une méthode simplifiée de congélation (sans l’utilisation d’un congélateur programmable) des masses embryogènes permet la survie de 100 % des lignées congelées. La maturation d’un grand nombre d’embryons somatiques a été fortement améliorée lorsque les masses embryogènes ont été étalées sur filtre papier placé sur milieu de culture à forte concentration en gelrite (8 g·L−1). Sous ces conditions, 94 % des lignées embryogènes régénèrent des embryons somatiques matures qui se développent en plantes. Clairement l’âge et la cryoconservation des lignées embryogènes ne réduisent pas leur potentiel embryogène.• Les besoins pour une intégration efficace de l’embryogenèse somatique au programme d’amélioration du mélèze, sont discutés.

中文翻译：

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杂交落叶松（Larix × eurolepis 和 Larix × marschlinsii）的简化和改进体细胞胚胎发生。育种前景

摘要• 克隆繁殖方法的发展，如体细胞胚胎发生，具有许多应用，如遗传改良植物的大规模生产和胚胎培养的低温储存适应性。自 90 年代以来，INRA 的研究人员一直从事落叶松属（Larix × eurolepis、Larix × marschlinsii）体细胞胚胎发生的研究。 • 这项工作的目的是改进和简化体细胞胚胎发生的所有步骤，并将该协议应用于新的杂交品种 REVE-VERT。• 在植物生长调节剂浓度降低的培养基（2.2 μM 的 2.4-二氯苯氧乙酸和 2.3 μM 的 6-苄基腺嘌呤）上，未成熟合子胚的体细胞胚胎发生起始频率很高 (65%)。胚胎块的简化冷冻保存方法（不需要可编程冷冻机）导致冷冻保存品系的 100% 恢复。将胚团分散在置于含有高浓度结冷胶（8 g·L-1）的培养基上的滤纸上时，大量体细胞胚的成熟度大大提高。在这些条件下，94% 的品系使体细胞胚成熟并发育成小植株。显然，老化和冷冻保存并没有降低胚胎块的胚胎发生潜力。• 讨论了将体细胞胚胎发生有效整合到落叶松育种计划中的要求。简历• Le développement de méthode de multiplication clonale,telle l'embryogenèse somatique，a de nombreuses Applications comme la production en masse de Plant génétiquement améliorés et la disponibilité desculturesembrygènes encryoconservation。Depuis les années 1990, l'INRA a engagé des recherches enembryogenèse somatique des mélèzes (Larix × eurolepis, Larix × marschlinsii).• L'objectif du travail a été de simplifier et d'améliorer et d'améliorer de somatique des mélèzes d'appliquer ce protocole à la nouvelle variété de mélèze hybride REVE-VERT.• L'initiation de l'embryogenèse somatique à partir d'embryons zygotiques immatures est obtenue à des fréquencesculture élevées (65 unten de conlieuées) hormonales réduites（2,2 μM d'acide 2.4-dichlorophenoxygenic et 2,3 μM de 6-benzyladenine）。Une méthode simplifiee de congélation (sans l'utilisation d'un congélateurprogrammable) des massembrygènes permet la survie de 100 % des lignées congelées。La maturation d'un grand nombre d'embryons somatiques a été fortement améliorée lorsque les massembrygènes ont été étalées sur filtre papier placé sur milieu deculture à forte concentration en gelrite (8 g·L−1)。Sous ces conditions, 94 % des lignéesemblemingegènes régénèrent des胚胎somatiques成熟qui se développent en plantes。Clairement l'âge et lacryoconservation des lignéesembrygènes ne réduisent pas leur potentielembrygène。• Les besoins pour une intégration efficace de l'embryogenèse somatique au program d'amélioration du mélèze, sont discutés。La maturation d'un grand nombre d'embryons somatiques a été fortement améliorée lorsque les mass embrygènes ont été étalées sur filtre papier placé sur milieu deculture à forte concentration en gelrite (8 g·L−1)。Sous ces conditions, 94 % des lignéesemblemingegènes régénèrent des胚胎somatiques成熟qui se développent en plantes。Clairement l'âge et lacryoconservation des lignéesembrygènes ne réduisent pas leur potentielembrygène。• Les besoins pour une intégration efficace de l'embryogenèse somatique au program d'amélioration du mélèze, sont discutés。La maturation d'un grand nombre d'embryons somatiques a été fortement améliorée lorsque les massembrygènes ont été étalées sur filtre papier placé sur milieu deculture à forte concentration en gelrite (8 g·L−1)。Sous ces conditions, 94 % des lignéesemblemingegènes régénèrent des胚胎somatiques成熟qui se développent en plantes。Clairement l'âge et lacryoconservation des lignéesembrygènes ne réduisent pas leur potentielembrygène。• Les besoins pour une intégration efficace de l'embryogenèse somatique au program d'amélioration du mélèze, sont discutés。