BACKGROUND Aquatic bird bornavirus 1 (ABBV-1) has been associated with neurological diseases in wild waterfowls. In Canada, presence of ABBV-1 was demonstrated by RT-qPCR and immunohistochemistry in tissues of waterfowls with history of neurological disease and inflammation of the central and peripheral nervous tissue, although causation has not been proven by pathogenesis experiments, yet. To date, in vitro characterization of ABBV-1 is limited to isolation in primary duck embryo fibroblasts. The objectives of this study were to describe isolation of ABBV-1 in primary duck embryonic fibroblasts (DEF), and characterize replication in DEF and three immortalized avian fibroblast cell lines (duck CCL-141, quail QT-35, chicken DF-1) in order to evaluate cellular permissivity and identify suitable cell lines for routine virus propagation. METHODS The virus was sequenced, and phylogenetic analysis performed on a segment of the N gene coding region. Virus spread in cell cultures, viral RNA and protein production, and titres were evaluated at different passages using immunofluorescence, RT-qPCR, western blotting, and tissue culture dose 50% (TCID50) assay, respectively. RESULTS The isolated ABBV-1 showed 97 and 99% identity to European ABBV-1 isolate AF-168 and North American ABBV-1 isolates 062-CQ and CG-N1489, and could infect and replicate in DEF, CCL-141, QT-35 and DF-1 cultures. Viral RNA was detected in all four cultures with highest levels observed in DEF and CCL-141, moderate in QT-35, and lowest in DF-1. N protein was detected in western blots from infected DEF, CCL-141 and QT-35 at moderate to high levels, but minimally in infected DF-1. Infectious titre was highest in DEF (between approximately 105 to 106 FFU / 106 cells). Regarding immortalized cell lines, CCL-141 showed the highest titre between approximately 104 to 105 FFU / 106 cells. DF-1 produced minimal infectious titre. CONCLUSIONS This study confirms the presence of ABBV-1 among waterfowl in Canada and reported additional in vitro characterization of this virus in different avian cell lines. ABBV-1 replicated to highest titre in DEF, followed by CCL-141 and QT-35, and poorly in DF-1. Our results showed that CCL-141 can be used instead of DEF for routine ABBV-1 production, if a lower titre is an acceptable trade-off for the simplicity of using immortalized cell line over primary culture.

中文翻译：

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安大略水产鸟类鸟痘病毒1的分离及其在永生化鸟类细胞系中复制的表征。

背景技术水生鸟类禽流感病毒1（ABBV-1）与野生水禽中的神经系统疾病有关。在加拿大，通过RT-qPCR和免疫组织化学方法在具有神经系统疾病史以及中枢神经和周围神经组织炎症的水禽组织中证实了ABBV-1的存在，尽管病因实验尚未证实其原因。迄今为止，ABBV-1的体外表征仅限于原代鸭胚成纤维细胞的分离。这项研究的目的是描述在原代鸭胚胎成纤维细胞（DEF）中分离ABBV-1的方法，并描述在DEF和三种永生化禽类成纤维细胞系中的复制（鸭CCL-141，鹌鹑QT-35，鸡DF-1）为了评估细胞的介导率并确定适合常规病毒繁殖的细胞系。方法对该病毒进行测序，并对N基因编码区的一部分进行系统发育分析。分别使用免疫荧光，RT-qPCR，western印迹和组织培养剂量50％（TCID50）分析，分别评估了病毒在细胞培养物中的传播，病毒RNA和蛋白质的产生以及效价的变化。结果分离出的ABBV-1与欧洲ABBV-1分离株AF-168和北美ABBV-1分离株062-CQ和CG-N1489具有97％和99％的同一性，并且可以在DEF，CCL-141，QT- 35和DF-1文化。在所有四种培养物中检测到病毒RNA，在DEF和CCL-141中观察到最高水平，在QT-35中观察到中等，在DF-1中观察到最低。在中等至高水平的受感染DEF，CCL-141和QT-35的蛋白质​​印迹中检测到N蛋白，但在受感染的DF-1中最低。DEF中的感染滴度最高（约105至106 FFU / 106细胞之间）。关于永生细胞系，CCL-141在约104至105 FFU / 106个细胞之间显示出最高滴度。DF-1产生的最小感染滴度。结论这项研究证实了加拿大水禽中ABBV-1的存在，并报道了该病毒在不同禽类细胞系中的其他体外特征。ABBV-1在DEF中的效价最高，其次是CCL-141和QT-35，而DF-1的效价却很差。我们的结果表明，如果为了在原代培养中使用永生化细胞系的简单性，可以接受较低的滴定度，那么可以使用CCL-141代替DEF进行常规ABBV-1生产。CCL-141在约104至105 FFU / 106个细胞之间显示出最高滴度。DF-1产生的最小感染滴度。结论这项研究证实了加拿大水禽中ABBV-1的存在，并报道了该病毒在不同禽类细胞系中的其他体外特征。ABBV-1在DEF中的滴度最高，其次是CCL-141和QT-35，而在DF-1中则较差。我们的结果表明，如果为了在原代培养中使用永生化细胞系的简单性，可以接受较低的滴度，则可以用CCL-141代替DEF进行常规ABBV-1生产。CCL-141在约104至105 FFU / 106个细胞之间显示出最高滴度。DF-1产生的最小感染滴度。结论这项研究证实了加拿大水禽中ABBV-1的存在，并报道了该病毒在不同禽类细胞系中的其他体外特征。ABBV-1在DEF中的效价最高，其次是CCL-141和QT-35，而DF-1的效价却很差。我们的结果表明，如果为了在原代培养中使用永生化细胞系的简单性，可以接受较低的滴定度，那么可以使用CCL-141代替DEF进行常规ABBV-1生产。ABBV-1在DEF中的滴度最高，其次是CCL-141和QT-35，而在DF-1中则较差。我们的结果表明，如果为了在原代培养中使用永生化细胞系的简单性，可以接受较低的滴度，则可以用CCL-141代替DEF进行常规ABBV-1生产。ABBV-1在DEF中的滴度最高，其次是CCL-141和QT-35，而在DF-1中则较差。我们的结果表明，如果为了在原代培养中使用永生化细胞系的简单性，可以接受较低的滴定度，那么可以使用CCL-141代替DEF进行常规ABBV-1生产。