A common renal disease, immunoglobulin A (IgA) nephropathy (IgAN), is associated with glomerular deposition of IgA1-containing immune complexes. IgA1 hinge region (HR) has up to six clustered O-glycans consisting of Ser/Thr-linked N-acetylgalactosamine with β1,3-linked galactose and variable sialylation. IgA1 glycoforms with some galactose-deficient (Gd) HR O-glycans play a key role in IgAN pathogenesis. The clustered and variable O-glycans make the IgA1 glycomic analysis challenging and better approaches are needed. Here, we report a comprehensive analytical workflow for IgA1 HR O-glycoform analysis. We combined an automated quantitative analysis of the HR O-glycopeptide profiles with sequential deglycosylation to remove all but Gd O-glycans from the HR. The workflow was tested using serum IgA1 from healthy subjects. Twelve variants of glycopeptides corresponding to the HR with three to six O-glycans were detected; nine glycopeptides carried up to three Gd O-glycans. Sites with Gd O-glycans were unambiguously identified by electron-transfer/higher-energy collision dissociation tandem mass spectrometry. Extracted ion chromatograms of isomeric glycoforms enabled quantitative assignment of Gd sites. The most frequent Gd site was T236, followed by S230, T233, T228, and S232. The new workflow for quantitative profiling of IgA1 HR O-glycoforms with site-specific resolution will enable identification of pathogenic IgA1 HR O-glycoforms in IgAN.

中文翻译：

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通过顺序去糖基化分析 IgA1 铰链区的 O-糖型。

一种常见的肾脏疾病，免疫球蛋白 A (IgA) 肾病 (IgAN)，与含 IgA1 的免疫复合物的肾小球沉积有关。IgA1 铰链区 (HR) 具有多达六个簇状 O-聚糖，由 Ser/Thr 连接的 N-乙酰半乳糖胺和 β1,3 连接的半乳​​糖和可变唾液酸化组成。IgA1 糖型与一些半乳糖缺乏 (Gd) HR O-聚糖在 IgAN 发病机制中起关键作用。聚集和可变的 O-聚糖使 IgA1 糖组学分析具有挑战性，因此需要更好的方法。在这里，我们报告了 IgA1 HR O-糖型分析的综合分析工作流程。我们将 HR O-糖肽谱的自动定量分析与顺序去糖基化相结合，以从 HR 中去除除 Gd O-聚糖以外的所有糖。该工作流程使用来自健康受试者的血清 IgA1 进行了测试。检测到与 HR 对应的 12 种糖肽变体，具有 3 到 6 个 O-聚糖；九种糖肽携带多达三个 Gd O-聚糖。具有 Gd O-聚糖的位点通过电子转移/高能碰撞解离串联质谱法明确鉴定。异构糖型的提取离子色谱图能够定量分配 Gd 位点。最常见的 Gd 位点是 T236，其次是 S230、T233、T228 和 S232。具有特定位点分辨率的 IgA1 HR O-糖型定量分析的新工作流程将能够识别 IgAN 中的致病性 IgA1 HR O-糖型。具有 Gd O-聚糖的位点通过电子转移/高能碰撞解离串联质谱法明确鉴定。异构糖型的提取离子色谱图能够定量分配 Gd 位点。最常见的 Gd 位点是 T236，其次是 S230、T233、T228 和 S232。具有特定位点分辨率的 IgA1 HR O-糖型定量分析的新工作流程将能够识别 IgAN 中的致病性 IgA1 HR O-糖型。具有 Gd O-聚糖的位点通过电子转移/高能碰撞解离串联质谱法明确鉴定。异构糖型的提取离子色谱图能够定量分配 Gd 位点。最常见的 Gd 位点是 T236，其次是 S230、T233、T228 和 S232。具有特定位点分辨率的 IgA1 HR O-糖型定量分析的新工作流程将能够识别 IgAN 中的致病性 IgA1 HR O-糖型。