Perturbation of thiol homeostasis in biological fluids are thought to be associated with several diseases, and reliable analytical methods for the determination of low molecular weight (LMW) thiols in human plasma or serum are thus required. In this study, a matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) method is described for high throughput determination of four LMW thiols (glutathione, cysteine, homocysteine and cysteinylglycine) in human serum. It is based on the use of a bromoacetyl functionalized C60 (Br-C60) as a derivatization reagent to label thiols. The Br-C60 labeling can add an 832-Da tag to thiols, which moves thiol signals to high mass region and effectively avoids the signal interference generated by the traditional MALDI matrix below 800 Da. The labeling can be completed within 5 min under microwave-assisted condition. Thereby, the Br-C60 labeling based MALDI-TOF MS analytical method can achieve high throughput analysis of LMW thiols in serum. Good linearities of the method for the thiols in human serum were obtained in the range of 0.5-500.0 μM with correlation coefficient (R) greater than 0.9960. The limit of detection is in the range of 0.07-0.18 μM for the investigated thiols in human serum with relative standard deviations of lower than 13.5% and recoveries ranging from 81.9 to 117.1%. Using the method, four thiols in microliter serum samples of breast cancer (BC) patients were determined. The result showed that the contents of the four thiols in BC serum samples significantly changed compared to the healthy control (HC).

中文翻译：

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开发基于 C60 的标记试剂，用于通过基质辅助激光解吸电离质谱法测定低分子量化合物 (II)：测定人血清中的硫醇

生物体液中硫醇稳态的扰动被认为与多种疾病有关，因此需要可靠的分析方法来测定人血浆或血清中的低分子量 (LMW) 硫醇。在本研究中，描述了一种基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱 (MALDI-TOF MS) 方法，用于高通量测定人血清中的四种 LMW 硫醇（谷胱甘肽、半胱氨酸、高半胱氨酸和半胱氨酰甘氨酸）。它基于使用溴乙酰官能化 C60 (Br-C60) 作为衍生化试剂来标记硫醇。Br-C60标记可以在硫醇上添加832-Da标签，将硫醇信号移动到高质量区域，有效避免传统MALDI基质在800 Da以下产生的信号干扰。在微波辅助条件下，标记可在 5 分钟内完成。因此，基于 Br-C60 标记的 MALDI-TOF MS 分析方法可以实现血清中 LMW 硫醇的高通量分析。在 0.5-500.0 μM 范围内，该方法对人血清中的硫醇具有良好的线性，相关系数 (R) 大于 0.9960。人血清中所研究的硫醇的检测限在 0.07-0.18 μM 范围内，相对标准偏差低于 13.5%，回收率范围为 81.9-117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。基于 Br-C60 标记的 MALDI-TOF MS 分析方法可以实现血清中 LMW 硫醇的高通量分析。在 0.5-500.0 μM 范围内，该方法对人血清中的硫醇具有良好的线性，相关系数 (R) 大于 0.9960。人血清中所研究的硫醇的检测限在 0.07-0.18 μM 范围内，相对标准偏差低于 13.5%，回收率范围为 81.9-117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。基于 Br-C60 标记的 MALDI-TOF MS 分析方法可以实现血清中 LMW 硫醇的高通量分析。在 0.5-500.0 μM 范围内，该方法对人血清中的硫醇具有良好的线性，相关系数 (R) 大于 0.9960。人血清中所研究的硫醇的检测限在 0.07-0.18 μM 范围内，相对标准偏差低于 13.5%，回收率范围为 81.9-117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。在 0.5-500.0 μM 范围内，该方法对人血清中的硫醇具有良好的线性，相关系数 (R) 大于 0.9960。人血清中所研究的硫醇的检测限在 0.07-0.18 μM 范围内，相对标准偏差低于 13.5%，回收率范围为 81.9-117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。在 0.5-500.0 μM 范围内，该方法对人血清中的硫醇具有良好的线性，相关系数 (R) 大于 0.9960。人血清中所研究的硫醇的检测限在 0.07-0.18 μM 范围内，相对标准偏差低于 13.5%，回收率范围为 81.9-117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。5%，回收率从 81.9% 到 117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。5%，回收率从 81.9% 到 117.1%。使用该方法，测定了乳腺癌 (BC) 患者微升血清样品中的四种硫醇。结果表明，与健康对照（HC）相比，BC血清样品中四种硫醇的含量发生了显着变化。