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Alteration of SC35 localization by transfection reagents.
Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Cell Research ( IF 5.1 ) Pub Date : 2020-01-15 , DOI: 10.1016/j.bbamcr.2020.118650
Arun Prasath Damodaran 1 , Thibault Courthéoux 1 , Erwan Watrin 1 , Claude Prigent 1
Affiliation  

Transfection is a powerful tool that enables introducing foreign nucleic acids into living cells in order to study the function of a gene product. Ever since the discovery of transfection many side effects or artifacts caused by transfection reagents have been reported. Here, we show that the transfection reagent, JetPRIME alters the localization of the splicing protein SC35 widely used as a nuclear speckle marker. We demonstrate that transfection of plasmids with JetPRIME leads to enlarged SC35 speckles and SC35 cytoplasmic granules. By contrast, transfection of the same plasmid with Lipofectamine 3000 does not have any effect on SC35 localization. The formation of SC35 cytoplasmic granules by JetPRIME-mediated transfection is independent of exogenous expression by plasmid and although similar in morphology they are distinct from P-bodies and stress granules. This method of transfection affected only SC35 and phosphorylated SR proteins but not the nuclear speckles. The JetPRIME-mediated transfection also showed compromised transcription in cells with enlarged SC35 speckles. Our work indicates that the use of JetPRIME alters SC35 localization and can affect gene expression and alternative splicing. Therefore, caution should be exercised when interpreting results after the use of a transient transfection system, particularly when the subject of the study is the function of a protein in the control of gene expression or mRNA splicing.

中文翻译:

通过转染试剂改变SC35的定位。

转染是一种功能强大的工具,可将外来核酸引入活细胞以研究基因产物的功能。自从发现转染以来,已经报道了许多由转染试剂引起的副作用或伪影。在这里,我们表明转染试剂JetPRIME改变了广泛用作核斑点标记的剪接蛋白SC35的定位。我们证明,JetPRIME的质粒转染导致SC35斑点和SC35细胞质颗粒扩大。相反,用Lipofectamine 3000转染同一质粒对SC35定位没有任何影响。通过JetPRIME介导的转染形成SC35细胞质颗粒与质粒的外源表达无关,尽管在形态上相似,但它们与P体和应激颗粒不同。这种转染方法仅影响SC35和磷酸化SR蛋白,但不影响核斑点。JetPRIME介导的转染在SC35斑点增大的细胞中也显示出转录受损。我们的工作表明,JetPRIME的使用会改变SC35的定位,并会影响基因表达和选择性剪接。因此,在使用瞬时转染系统后解释结果时应格外小心,尤其是当研究的主题是蛋白质在基因表达或mRNA剪接控制中的功能时。这种转染方法仅影响SC35和磷酸化SR蛋白,但不影响核斑点。JetPRIME介导的转染在SC35斑点增大的细胞中也显示出转录受损。我们的工作表明,JetPRIME的使用会改变SC35的定位,并会影响基因表达和选择性剪接。因此,在使用瞬时转染系统后解释结果时应格外小心,尤其是当研究的主题是蛋白质在基因表达或mRNA剪接控制中的功能时。这种转染方法仅影响SC35和磷酸化SR蛋白,但不影响核斑点。JetPRIME介导的转染在SC35斑点增大的细胞中也显示出转录受损。我们的工作表明,使用JetPRIME可以改变SC35的定位,并可能影响基因表达和选择性剪接。因此,在使用瞬时转染系统后解释结果时应格外小心,尤其是当研究的主题是蛋白质在基因表达或mRNA剪接控制中的功能时。我们的工作表明,JetPRIME的使用会改变SC35的定位,并会影响基因表达和选择性剪接。因此,在使用瞬时转染系统后解释结果时应格外小心,尤其是当研究的主题是蛋白质在基因表达或mRNA剪接控制中的功能时。我们的工作表明,使用JetPRIME可以改变SC35的定位,并可能影响基因表达和选择性剪接。因此,在使用瞬时转染系统后解释结果时应格外小心,尤其是当研究的主题是蛋白质在基因表达或mRNA剪接控制中的功能时。
更新日期:2020-01-15
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