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Direct Observation of the Formation of CRISPR-Cas12a R-loop Complex at the Single-Molecule Level
Chemical Communications ( IF 6.164 ) Pub Date : 2020-01-14 , DOI: 10.1039/c9cc08325a
Yang Cui; Yangchao Tang; Meng Liang; Qinghua Ji; Yan Zeng; Hui Chen; Jie Lan; Peng Jin; Lei Wang; Guangtao Song; Jizhong Lou

Here we develop an optical tweezers based single-molecule manipulation assay to detect the formation of the R-loop complex in Cas12a system and characterize its thermodynamic stability. We found that the formation of the R-loop complex induces a two-step unfolding of a DNA hairpin containing the target sequence, the non-target sequence binds loosely to Cas12a and can be easily released from the complex, and the Nuc domain of Cas12a plays key roles in target binding and R-loop formation.
更新日期:2020-01-14

 

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