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Direct observation of the formation of a CRISPR-Cas12a R-loop complex at the single-molecule level.
Chemical Communications ( IF 5.996 ) Pub Date : 2020-01-23 , DOI: 10.1039/c9cc08325a
Yang Cui,Yangchao Tang,Meng Liang,Qinghua Ji,Yan Zeng,Hui Chen,Jie Lan,Peng Jin,Lei Wang,Guangtao Song,Jizhong Lou

Here, we develop an optical tweezers-based single-molecule manipulation assay to detect the formation of an R-loop complex in the Cas12a system and characterize its thermodynamic stability. We found that the formation of the R-loop complex induces a two-step unfolding of a DNA hairpin containing the target sequence, the non-target sequence binds loosely to Cas12a and can be easily released from the complex, and the Nuc domain of Cas12a plays key roles in target binding and R-loop formation.
更新日期:2020-02-19

 

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