Insect-derived serine protease inhibitors (serpins) exhibit multiple inhibitory activities. Todate some functional roles for serpins in Hyphantria cunea Drury have been identified. Here, new functional features of the H. cunea serine protease inhibitor (dHC-serpin) were characterized. In this study, the cDNA encoding serpin was amplified from H. cunea (dHC) pupa fat body total RNA using RT-PCR. The full-length dHC-serpin cDNA encoded a protein of 440 amino acids with a predicted 19-amino acid signal peptide and a 421-amino acid functional domain. The functional domain was cloned into a pSUMO vector and transformed into Escherichia coli, resulting in the production of a pSUMO-dHC-serpin fusion protein. The soluble form of this protein was then purified by Ni-IDA chromatography. The SUMO-dHC-serpin fusion protein was then cleaved using a SUMO protease and purified again by Ni-IDA chromatography. dHC-serpin did not inhibit trypsin, elastase, proteinase K or cathepsin B, but strongly inhibited papain. The inhibitor retained its inhibitory activity over a broad range of pH (pH 2-12), temperature (20-50 °C), and DTT concentration (up to 100 mM). A complete loss of inhibitory activity was observed at pH 13 and 70 °C. Serpins generally serve as inhibitors that use a mobile reactive center loop (RCL) as bait to trap protease targets. dHC-serpin, like others serpins, binds papain using the RCL structure.

中文翻译：

---

表现出对木瓜蛋白酶活性的丝状丝瓜丝氨酸蛋白酶抑制剂的克隆和高水平SUMO介导的融合表达。

昆虫衍生的丝氨酸蛋白酶抑制剂（丝氨酸蛋白酶抑制剂）表现出多种抑制活性。迄今为止，已经鉴定出丝氨酸蛋白酶抑制剂在豚鼠中的一些功能性作用。在这里，表征了H. cunea丝氨酸蛋白酶抑制剂（dHC-丝氨酸蛋白酶抑制剂）。在这项研究中，使用RT-PCR从豚鼠（dHC）fat脂肪体总RNA中扩增了编码丝氨酸蛋白酶抑制蛋白（serpin）的cDNA。全长dHC-serpin cDNA编码440个氨基酸的蛋白质，并带有一个19个氨基酸的信号肽和一个421个氨基酸的功能域。将功能域克隆到pSUMO载体中，并转化到大肠杆菌中，从而产生pSUMO-dHC-serpin融合蛋白。然后通过Ni-IDA色谱法纯化该蛋白质的可溶形式。然后使用SUMO蛋白酶切割SUMO-dHC-丝氨酸蛋白酶抑制蛋白融合蛋白，并通过Ni-IDA色谱再次纯化。dHC-serpin不会抑制胰蛋白酶，弹性蛋白酶，蛋白酶K或组织蛋白酶B，但会强烈抑制木瓜蛋白酶。该抑制剂在很宽的pH值（pH 2-12），温度（20-50°C）和DTT浓度（最高100 mM）范围内都保持了抑制活性。在pH 13和70°C下观察到抑制活性的完全丧失。丝氨酸蛋白酶抑制剂通常作为抑制剂使用移动反应中心环（RCL）作为诱饵来捕获蛋白酶靶标。与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂一样，dHC-丝氨酸蛋白酶抑制剂使用RCL结构结合木瓜蛋白酶。该抑制剂在很宽的pH值（pH 2-12），温度（20-50°C）和DTT浓度（最高100 mM）范围内都保持了抑制活性。在pH 13和70°C下观察到抑制活性的完全丧失。丝氨酸蛋白酶抑制剂通常作为抑制剂使用移动反应中心环（RCL）作为诱饵来捕获蛋白酶靶标。与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂一样，dHC-丝氨酸蛋白酶抑制剂使用RCL结构结合木瓜蛋白酶。该抑制剂在很宽的pH值（pH 2-12），温度（20-50°C）和DTT浓度（最高100 mM）范围内都保持了抑制活性。在pH 13和70°C下观察到抑制活性的完全丧失。丝氨酸蛋白酶抑制剂通常用作抑制剂，其使用移动反应中心环（RCL）作为诱饵来捕获蛋白酶靶标。与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂一样，dHC-丝氨酸蛋白酶抑制剂使用RCL结构结合木瓜蛋白酶。