BACKGROUND Lipids and starch are important feedstocks for bioenergy production. Genetic studies on the biosyntheses of lipids and starch in green microalgae have drawn significant attention recently. In these studies, quantifications of lipids and starch are required to clarify the causal effects. While lipids are assayed with similar procedures worldwide, starch in green microalgae has been measured using various methods with deficiencies in accuracy or high cost. RESULTS A simple, accurate and low cost procedure for routine quantification of starch in green microalgae was developed. This procedure consists of quick-freezing of the cells, solvent extraction of the pigments, 134 °C autoclaving and glucoamylase double digestions of starch, followed by a glucose assay using the dinitrosalicylic acid reagent. This procedure was optimized to quantify starch in small volumes of green microalgal culture. The accuracy of starch quantification using this procedure was 102.3 ± 2.5% (mean ± SD, n = 6), as indicated by using cornstarch as internal controls. The working protocol is available at http://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.2mhgc36 . CONCLUSIONS This quantification approach overcomes the current problems in the starch quantification of green microalgae such as inaccuracy and high cost. This approach would provide an opportunity to compare the effects of genetic, physiological or cultivation manipulations on the productivity of starch in green microalgae elucidated in different labs, which is essential in the enhancement of lipid productivity studies in microalgae.

中文翻译：

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简单，准确，低成本的绿色微藻淀粉定量方法的优化。

背景技术脂质和淀粉是用于生物能源生产的重要原料。近年来，关于绿色微藻中脂质和淀粉生物合成的遗传研究引起了广泛关注。在这些研究中，需要对脂质和淀粉进行定量以阐明因果关系。尽管在全球范围内都使用类似的程序对脂质进行了测定，但已使用各种方法对绿色微藻中的淀粉进行了测量，但准确性或成本较高。结果开发了一种简单，准确和低成本的方法，用于常规定量绿色微藻中的淀粉。该程序包括细胞的快速冷冻，色素的溶剂萃取，134°C高压灭菌和淀粉的葡糖淀粉酶双消化，然后使用二硝基水杨酸试剂进行葡萄糖测定。该程序经过优化，可定量少量绿色微藻培养物中的淀粉。如使用玉米淀粉作为内部对照所示，使用此程序进行淀粉定量的准确性为102.3±2.5％（平均值±SD，n = 6）。该工作协议可从http://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.2mhgc36获得。结论该定量方法克服了绿色微藻类淀粉定量中的当前问题，例如准确性和高成本。这种方法将提供一个机会，可以比较遗传，生理或栽培操作对不同实验室阐明的绿色微藻中淀粉生产率的影响，这对于增强微藻中脂质生产率的研究至关重要。如使用玉米淀粉作为内部对照所示，使用此程序进行淀粉定量的准确性为102.3±2.5％（平均值±SD，n = 6）。该工作协议可从http://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.2mhgc36获得。结论该定量方法克服了绿色微藻类淀粉定量中的当前问题，例如准确性和高成本。这种方法将提供一个机会，可以比较遗传，生理或栽培操作对不同实验室阐明的绿色微藻中淀粉生产率的影响，这对于增强微藻中脂质生产率的研究至关重要。如使用玉米淀粉作为内部对照所示，使用此程序进行淀粉定量的准确性为102.3±2.5％（平均值±SD，n = 6）。该工作协议可从http://dx.doi.org/10.17504/protocols.io.2mhgc36获得。结论该定量方法克服了绿色微藻类淀粉定量中的当前问题，例如准确性和高成本。这种方法将提供一个机会，可以比较遗传，生理或栽培操作对不同实验室阐明的绿色微藻中淀粉生产率的影响，这对于增强微藻中脂质生产率的研究至关重要。17504 / protocols.io.2mhgc36。结论该定量方法克服了绿色微藻类淀粉定量中的当前问题，例如准确性和高成本。这种方法将提供一个机会，可以比较遗传，生理或栽培操作对不同实验室阐明的绿色微藻中淀粉生产率的影响，这对于增强微藻中脂质生产率的研究至关重要。17504 / protocols.io.2mhgc36。结论该定量方法克服了绿色微藻类淀粉定量中的当前问题，例如准确性和高成本。这种方法将提供一个机会，可以比较遗传，生理或栽培操作对不同实验室阐明的绿色微藻中淀粉生产率的影响，这对于增强微藻中脂质生产率的研究至关重要。