Lentiviruses are quite effective gene delivery systems for stable production of genetically engineered human cells. However, prior to using lentivirus to deliver genetic materials to cells of interest, the normal course of production of these lentiviruses involves a lengthy collection, purification, preservation, and quantification process. In this report, we demonstrate the ability for producer HEK293T cells to simultaneously produce lentiviral particles and transduce (i.e., infect) target cells through a membrane-based coculture system in a continuous, real-time mode which negates the need for a separate viral collection and quantification process. The coculture system was evaluated for major design features such as variations in HEK293T seeding density, target cell type densities, as well as membrane porosities to identify key relationships between lentiviral particle production rate and infection kinetics for adherent and suspension cell types. As a proof-of-concept for the creation of an engineered cell immunotherapy, we describe the ability to engineer human T cells isolated from PBMCs under the control of this coculture system in under 6 days with a GFP construct. These studies suggest the capability to combine and more closely automate the transfection/transduction process in order to facilitate well-timed and cost-effective transduction of target cell types. These experiments provide novel insight into the forthcoming transition into improved manufacturing systems for viral production and subsequent cell engineering.

中文翻译：

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使用工程共培养系统，通过生产细胞实时转移慢病毒颗粒。

慢病毒是稳定生产基因工程人类细胞的非常有效的基因传递系统。然而，在使用慢病毒将遗传物质递送至目的细胞之前，这些慢病毒的正常生产过程涉及冗长的收集，纯化，保存和定量过程。在本报告中，我们证明了生产者HEK293T细胞能够同时产生慢病毒颗粒并通过基于膜的共培养系统以连续，实时的方式转导（即感染）靶细胞的能力，从而无需单独收集病毒和量化过程。对共培养系统进行了主要设计功能评估，例如HEK293T接种密度，靶细胞类型密度，以及膜的孔隙率，以确定慢病毒颗粒产生率与粘附和悬浮细胞类型的感染动力学之间的关键关系。作为创建工程化细胞免疫疗法的概念验证，我们描述了使用GFP构建体在不到6天的时间里，工程化从该共培养系统控制下分离自PBMC的人T细胞的能力。这些研究表明能够结合并更紧密地自动化转染/转导过程，以促进对靶细胞类型的适时且具有成本效益的转导。这些实验为即将过渡到用于病毒生产和后续细胞工程的改良制造系统提供了新颖的见解。作为创建工程化细胞免疫疗法的概念验证，我们描述了使用GFP构建体在不到6天的时间里，工程化从该共培养系统控制下分离自PBMC的人T细胞的能力。这些研究表明能够结合并更紧密地自动化转染/转导过程，以促进对靶细胞类型的适时且具有成本效益的转导。这些实验为即将过渡到用于病毒生产和后续细胞工程的改良制造系统提供了新颖的见解。作为创建工程化细胞免疫疗法的概念验证，我们描述了使用GFP构建体在不到6天的时间里，工程化从该共培养系统控制下分离自PBMC的人T细胞的能力。这些研究表明能够结合并更紧密地自动化转染/转导过程，以促进对靶细胞类型的适时且具有成本效益的转导。这些实验为即将过渡到用于病毒生产和后续细胞工程的改良制造系统提供了新颖的见解。这些研究表明能够结合并更紧密地自动化转染/转导过程，以促进对靶细胞类型的适时且具有成本效益的转导。这些实验为即将过渡到用于病毒生产和后续细胞工程的改良制造系统提供了新颖的见解。这些研究表明能够结合并更紧密地自动化转染/转导过程，以促进对靶细胞类型的适时且具有成本效益的转导。这些实验为即将过渡到用于病毒生产和后续细胞工程的改良制造系统提供了新颖的见解。