Abstract Interleukin-9 (IL-9) is a cytokine secreted by T-helper (Th)9 cells, and activin A can enhance Th9 cell differentiation. However, whether activin A affects IL-9 production by natural killer (NK) cells remains unclear. Herein, we found that not only Th cells, but also CD3−CD49b+NKp46+ NK cells of Balb/c mice produced IL-9. Although activin A promoted IL-9 expression in CD4+ Th cells, it inhibited IL-9 production by CD49b+NKp46+ NK cells in mice. Furthermore, the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) results showed that mouse NK cells could secrete mature IL-9 protein, and activin A inhibited IL-9 release by NK cells. Additionally, activin A inhibited interferon (IFN)-γ production in splenic NK cells in mice, but promoted IL-2 production, and did not alter the production of IL-10. Western blotting results showed that levels of activin type IIA receptor (ActRIIA), Smad3 and phosphorylated-Smad3 (p-SMAD3) protein increased in activin A-treated splenic NK cells, compared with that in control NK cells. The inhibitory effects of activin A on IL-9 production by NK cells were attenuated in the presence of activin antagonist follistatin (FST) or Smad3 knockdown to NK cells. These data suggest that although activin A up-regulates IL-9 expression in Th cells, it inhibits IL-9 production in NK cells through Smad3 signaling.

中文翻译：

---

激活素 A 通过 Smad3 信号传导对小鼠 NK 细胞产生 IL-9 的抑制作用

摘要 白细胞介素9（IL-9）是辅助性T（Th）9细胞分泌的一种细胞因子，激活素A可增强Th9细胞的分化。然而，激活素 A 是否影响自然杀伤 (NK) 细胞产生 IL-9 尚不清楚。在此，我们发现Balb/c小鼠的不仅Th细胞产生IL-9，CD3-CD49b+NKp46+ NK细胞也产生IL-9。尽管激活素 A 促进了 CD4+ Th 细胞中 IL-9 的表达，但它抑制了小鼠中 CD49b+NKp46+ NK 细胞产生的 IL-9。此外，酶联免疫吸附试验 (ELISA) 结果表明，小鼠 NK 细胞可以分泌成熟的 IL-9 蛋白，激活素 A 抑制 NK 细胞释放 IL-9。此外，激活素 A 抑制小鼠脾脏 NK 细胞中干扰素 (IFN)-γ 的产生，但促进 IL-2 的产生，并且不会改变 IL-10 的产生。蛋白质印迹结果显示，与对照 NK 细胞相比，激活素 A 处理的脾脏 NK 细胞中激活素 IIA 型受体 (ActRIIA)、Smad3 和磷酸化-Smad3 (p-SMAD3) 蛋白的水平增加。在激活素拮抗剂卵泡抑素 (FST) 或 Smad3 敲低 NK 细胞的情况下，激活素 A 对 NK 细胞产生 IL-9 的抑制作用减弱。这些数据表明，虽然激活素 A 上调 Th 细胞中 IL-9 的表达，但它通过 Smad3 信号传导抑制 NK 细胞中 IL-9 的产生。在激活素拮抗剂卵泡抑素 (FST) 或 Smad3 敲低 NK 细胞的情况下，激活素 A 对 NK 细胞产生 IL-9 的抑制作用减弱。这些数据表明，虽然激活素 A 上调 Th 细胞中 IL-9 的表达，但它通过 Smad3 信号传导抑制 NK 细胞中 IL-9 的产生。在激活素拮抗剂卵泡抑素 (FST) 或 Smad3 敲低 NK 细胞的情况下，激活素 A 对 NK 细胞产生 IL-9 的抑制作用减弱。这些数据表明，虽然激活素 A 上调 Th 细胞中 IL-9 的表达，但它通过 Smad3 信号传导抑制 NK 细胞中 IL-9 的产生。