Even though the presence of endocrine disrupting chemicals (EDCs) with thyroid hormone (TH)-like activities in the environment is a major health concern, the methods for their efficient detection and monitoring are still limited. Here we describe a novel cell assay, based on the translocation of a green fluorescent protein (GFP)-tagged chimeric molecule of glucocorticoid receptor (GR) and the thyroid receptor beta (TRβ) from the cytoplasm to the nucleus in the presence of TR ligands. Unlike the constitutively nuclear TRβ, this GFP-GR-TRβ chimera is cytoplasmic in the absence of hormone while translocating to the nucleus in a time- and concentration-dependent manner upon stimulation with triiodothyronine (T3) and thyroid hormone analogue, TRIAC, while the reverse triiodothyronine (3,3',5'-triiodothyronine, or rT3) was inactive. Moreover, GFP-GR-TRβ chimera does not show any cross-reactivity with the GR-activating hormones, thus providing a clean system for the screening of TR beta-interacting EDCs. Using this assay, we demonstrated that Bisphenol A (BPA) and 3,3',5,5'-Tetrabromobisphenol (TBBPA) induced GFP-GR-TRβ translocation at micro molar concentrations. We screened over 100 concentrated water samples from different geographic locations in the United States and detected a low, but reproducible contamination in 53% of the samples. This system provides a novel high-throughput approach for screening for endocrine disrupting chemicals (EDCs) interacting with TR beta.

中文翻译：

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新型基于细胞的测定法，用于检测与甲状腺受体β相互作用的环境污染物。

尽管在环境中存在具有类甲状腺激素（TH）活性的内分泌干扰化学物质（EDC）是一个主要的健康问题，但对其有效检测和监测的方法仍然受到限制。在这里，我们描述了一种新型的细胞测定法，该方法基于存在TR配体的情况下，标记有绿色荧光蛋白（GFP）的糖皮质激素受体（GR）和甲状腺受体β（TRβ）嵌合分子从细胞质向细胞核移位。 。与本构核TRβ不同，这种GFP-GR-TRβ嵌合体在不存在激素的情况下呈胞质状态，而在受到三碘甲腺嘌呤（T3）和甲状腺激素类似物TRIAC刺激时，以时间和浓度依赖性的方式转移到核中。反向三碘甲状腺素（3,3'，5'-三碘甲状腺素或rT3）无效。此外，GFP-GR-TRβ嵌合体与GR激活激素没有交叉反应，因此为筛选与TRβ相互作用的EDC提供了一个干净的系统。使用该测定法，我们证明了双酚A（BPA）和3,3'，5,5'-四溴双酚（TBBPA）在微摩尔浓度下诱导GFP-GR-TRβ易位。我们筛选了来自美国不同地理位置的100多个浓缩水样品，并在53％的样品中检测到低但可重现的污染。该系统提供了一种新颖的高通量方法，用于筛选与TR beta相互作用的内分泌干扰物（EDC）。我们证明了双酚A（BPA）和3,3'，5,5'-四溴双酚（TBBPA）在微摩尔浓度下诱导GFP-GR-TRβ易位。我们筛选了来自美国不同地理位置的100多个浓缩水样品，并在53％的样品中检测到低但可重现的污染。该系统提供了一种新颖的高通量方法，用于筛选与TR beta相互作用的内分泌干扰物（EDC）。我们证明了双酚A（BPA）和3,3'，5,5'-四溴双酚（TBBPA）在微摩尔浓度下诱导GFP-GR-TRβ易位。我们筛选了来自美国不同地理位置的100多个浓缩水样品，并在53％的样品中检测到了低但可重现的污染。该系统提供了一种新颖的高通量方法，用于筛选与TR beta相互作用的内分泌干扰物（EDC）。