Before 2013, the diagnosis of about 30% to 45% cases of primary myelofibrosis (PMF) and essential thrombocythemia (ET) posed a diagnostic difficulty because of the missing reliable clonal marker. Calreticulin (CALR) mutation was identified as a recurrent mutation in about 60% to 88% of JAK2/MPL-negative PMF and ET. Molecular methods like Sanger sequencing and polymerase chain reaction (PCR) are considered gold standard, but they have limited availability, complex techniques, and labor intensive. In contrast to molecular methods, immunohistochemistry (IHC) is a widely available, rapid, simple, and cost-effective option. There are only few studies evaluating the utility of IHC for CALR mutation detection. Hence, we studied the role of IHC in CALR mutation detection and compared it with PCR. Thirty-one JAK2V617F-negative PMF and ET were evaluated for CALR mutation status. PCR was done and interpreted by comparing bands with the expected product size. The bone marrow biopsy was simultaneously put up for IHC using antimutated CALR monoclonal antibody (CAL2). CALR mutation was detected in 64.5% (20/31) cases. Prevalence of CALR mutation in JAK2-negative PMF and ET was 60.9% (14/23) and 75% (6/8), respectively. Sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of IHC analyzed were 89.4%, 100%, 100%, and 84.6%, respectively. A very good level of agreement (κ=0.86) was observed between PCR and IHC. We suggest that IHC is the best screening test to detect CALR mutation in resource limited countries with limited availability and affordability of molecular methods.

中文翻译：

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免疫组织化学法检测钙网蛋白突变

2013 年之前，由于缺少可靠的克隆标志物，约 30% 至 45% 的原发性骨髓纤维化 (PMF) 和原发性血小板增多症 (ET) 病例的诊断构成了诊断困难。钙网蛋白 (CALR) 突变被确定为 JAK2/MPL 阴性 PMF 和 ET 中约 60% 至 88% 的复发突变。桑格测序和聚合酶链反应 (PCR) 等分子方法被认为是金标准，但它们的可用性有限、技术复杂且劳动强度大。与分子方法相比，免疫组织化学 (IHC) 是一种广泛可用、快速、简单且具有成本效益的选择。只有少数研究评估了 IHC 在 CALR 突变检测中的效用。因此，我们研究了 IHC 在 CALR 突变检测中的作用，并将其与 PCR 进行了比较。评估了 31 个 JAK2V617F 阴性 PMF 和 ET 的 CALR 突变状态。通过将条带与预期产物大小进行比较来完成和解释 PCR。同时使用抗突变的 CALR 单克隆抗体 (CAL2) 进行骨髓活检以进行 IHC。在 64.5% (20/31) 的病例中检测到 CALR 突变。JAK2 阴性 PMF 和 ET 中 CALR 突变的流行率分别为 60.9% (14/23) 和 75% (6/8)。分析的 IHC 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。通过将条带与预期产物大小进行比较来完成和解释 PCR。同时使用抗突变的 CALR 单克隆抗体 (CAL2) 进行骨髓活检以进行 IHC。在 64.5% (20/31) 的病例中检测到 CALR 突变。JAK2 阴性 PMF 和 ET 中 CALR 突变的流行率分别为 60.9% (14/23) 和 75% (6/8)。分析的 IHC 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。通过将条带与预期产物大小进行比较来完成和解释 PCR。同时使用抗突变的 CALR 单克隆抗体 (CAL2) 进行骨髓活检以进行 IHC。在 64.5% (20/31) 的病例中检测到 CALR 突变。JAK2 阴性 PMF 和 ET 中 CALR 突变的流行率分别为 60.9% (14/23) 和 75% (6/8)。分析的 IHC 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。同时使用抗突变的 CALR 单克隆抗体 (CAL2) 进行骨髓活检以进行 IHC。在 64.5% (20/31) 的病例中检测到 CALR 突变。JAK2 阴性 PMF 和 ET 中 CALR 突变的流行率分别为 60.9% (14/23) 和 75% (6/8)。分析的 IHC 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。同时使用抗突变的 CALR 单克隆抗体 (CAL2) 进行骨髓活检以进行 IHC。在 64.5% (20/31) 的病例中检测到 CALR 突变。JAK2 阴性 PMF 和 ET 中 CALR 突变的流行率分别为 60.9% (14/23) 和 75% (6/8)。分析的 IHC 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。分析的 IHC 的特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。分析的 IHC 的特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为 89.4%、100%、100% 和 84.6%。在 PCR 和 IHC 之间观察到非常好的一致性 (κ=0.86)。我们建议 IHC 是在资源有限的国家检测 CALR 突变的最佳筛查试验，分子方法的可用性和负担能力有限。