Streptomyces coelicolor A3(2), an obligately aerobic, oxidase-positive, and filamentous soil bacterium, lacks a soluble cytochrome c in its respiratory chain, having instead a membrane-associated diheme c-type cytochrome, QcrC. This necessitates complex formation to allow electron transfer between the cytochrome bcc and aa3 oxidase respiratory complexes. Combining genetic complementation studies with in-gel cytochrome oxidase activity staining, we demonstrate that the complete qcrCAB-ctaCDFE gene locus on the chromosome, encoding, respectively, the bcc and aa3 complexes, is required to manifest a cytochrome oxidase enzyme activity in both spores and mycelium of a qcr-cta deletion mutant. Blue-native-PAGE identified a cytochrome aa3 oxidase complex of approximately 270 kDa, which catalyzed oxygen-dependent diaminobenzidine oxidation without the requirement for exogenously supplied cytochrome c, indicating association with QcrC. Furthermore, higher molecular mass complexes were identified upon addition of soluble cytochrome c, suggesting the supercomplex is unstable and readily dissociates into subcomplexes lacking QcrC. Immunological and mass spectrometric analyses of active, high-molecular mass oxidase-containing complexes separated by clear-native PAGE identified key subunits of both the bcc complex and the aa3 oxidase, supporting supercomplex formation. Our data also indicate that the cytochrome b QcrB of the bcc complex is less abundant in spores compared with mycelium.

中文翻译：

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链霉菌A3（2）有氧呼吸链中的细胞色素bcc-aa3氧化酶超复合物。

天蓝色链霉菌A3（2）是一种专性需氧，氧化酶阳性和丝状土壤细菌，在其呼吸链中缺乏可溶性细胞色素c，而是具有与膜相关的双血红素c型细胞色素QcrC。这需要形成复合物以允许电子在细胞色素bcc和aa3氧化酶呼吸复合物之间转移。结合遗传互补研究与凝胶内细胞色素氧化酶活性染色，我们证明了染色体上完整的qcrCAB-ctaCDFE基因位点分别编码bcc和aa3复合体，需要在两个孢子和两个细胞中均表现出细胞色素氧化酶活性。 qcr-cta缺失突变体的菌丝体。Blue-native-PAGE鉴定出约270 kDa的细胞色素aa3氧化酶复合物，其催化氧依赖性二氨基联苯胺的氧化而不需要外源提供的细胞色素c，表明与QcrC缔合。此外，在添加可溶性细胞色素c后鉴定出较高分子量的复合物，这表明该超级复合物是不稳定的，并且容易分解成缺乏QcrC的亚复合物。免疫和质谱分析活性的，含有高分子质量氧化酶的复合物，并用纯天然PAGE分离，鉴定了bcc复合物和aa3氧化酶的关键亚基，支持超复合物的形成。我们的数据还表明，与菌丝体相比，bcc复合物的细胞色素b QcrB在孢子中含量较低。加入可溶性细胞色素c后，鉴定出较高分子量的复合物，这表明该超级复合物是不稳定的，易于分解为缺乏QcrC的亚复合物。免疫和质谱分析活性的，含有高分子质量氧化酶的复合物，并用纯天然PAGE分离，鉴定了bcc复合物和aa3氧化酶的关键亚基，支持超复合物的形成。我们的数据还表明，与菌丝体相比，bcc复合物的细胞色素b QcrB在孢子中含量较低。加入可溶性细胞色素c后，鉴定出较高分子量的复合物，这表明该超级复合物是不稳定的，易于分解为缺乏QcrC的亚复合物。免疫和质谱分析活性的，含有高分子质量氧化酶的复合物，并用纯天然PAGE分离，鉴定了bcc复合物和aa3氧化酶的关键亚基，支持超复合物的形成。我们的数据还表明，与菌丝体相比，bcc复合物的细胞色素b QcrB在孢子中含量较低。通过透明天然PAGE分离的含有高分子氧化酶的复合物可鉴定bcc复合物和aa3氧化酶的关键亚基，从而支持超复合物的形成。我们的数据还表明，与菌丝体相比，bcc复合物的细胞色素b QcrB在孢子中含量较低。通过透明天然PAGE分离的含有高分子氧化酶的复合物可鉴定bcc复合物和aa3氧化酶的关键亚基，从而支持超复合物的形成。我们的数据还表明，与菌丝体相比，bcc复合物的细胞色素b QcrB在孢子中含量较低。