We report here the isolation, characterization on genomic structure and expression of the D. melanogaster homolog of human parkin. The 2,122 bp parkin gene sequence contains six exons that form a 1,449 bp transcript encoding a protein of 482 amino acids. 151 bp of 5' and 112 bp of 3' untranslated regions were identified by a combination of 5'-RACE/primer extension and 3'-RACE, respectively. The 5' UTR contains three transcription initiation sites. Neither a classical TATA nor a CAAT box was found in the putative promoter sequence. However, binding sites for AhR-Arnt, AP4, NF1 and GATA transcription factors were identified. Transient transfection analysis of the 5' UTR confirmed its promoter activity in HEK 293 cells and SH-SY5Y neuronal cells using a dual luciferase reporting system. The amino acid sequence of D. melanogaster Parkin exhibits 42%, 43% and 43% identity to that of human, mouse and rat, respectively, representing a 54 kDa protein band via western blot analysis. It shows a high degree of conservation in the Ubiquitin-like domain at the N-terminus (34%), the In-Between RING finger domains (IBR, 65-69%), and the RING finger domains at the C-terminus (56-57%). The expression pattern of D. melanogaster parkin varies during the developmental stages, with the highest expression in the adult stage as measured by competitive RT-PCR. From immunostainings of the embryo, D. melanogaster parkin was expressed slightly higher in the central nervous system (brain and nerve cord) during the late embryonic stage.

中文翻译：

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果蝇黑色素蛋白基因组的组织和表达。

我们在这里报告了人类parkin的D. melanogaster同源基因的基因组结构的分离，鉴定和表达。2122 bp的Parkin基因序列包含6个外显子，这些外显子形成1449 bp的转录本，编码482个氨基酸的蛋白质。通过5'-RACE /引物延伸和3'-RACE的组合分别鉴定了151'的5'和112'的3'非翻译区。5'UTR包含三个转录起始位点。在推定的启动子序列中均未发现经典的TATA或CAAT框。但是，AhR Arnt，AP4，NF1和GATA转录因子的结合位点被确定。使用双重荧光素酶报告系统对5'UTR的瞬时转染分析证实了其在HEK 293细胞和SH-SY5Y神经元细胞中的启动子活性。D的氨基酸序列。黑色素蛋白Parkin与人，小鼠和大鼠分别具有42％，43％和43％的同一性，通过蛋白质印迹分析代表54 kDa蛋白带。它在N端的泛素样结构域（34％），RING指间结构域（IBR，65-69％）和C端的RING指结构域（ 56-57％）。D. melanogaster parkin的表达模式在发育阶段有所不同，通过竞争性RT-PCR测定，成人阶段的表达最高。根据胚胎的免疫染色，在晚期胚胎阶段，中枢神经系统（大脑和神经索）中的黑腹果蝇D.帕金森蛋白表达略高。通过蛋白质印迹分析代表54 kDa蛋白带。它在N端的泛素样结构域（34％），RING指间结构域（IBR，65-69％）和C端的RING指结构域（ 56-57％）。D. melanogaster parkin的表达模式在发育阶段有所不同，通过竞争性RT-PCR测定，成人阶段的表达最高。根据胚胎的免疫染色，在晚期胚胎阶段，中枢神经系统（大脑和神经索）中的黑腹果蝇D.帕金森蛋白表达略高。通过蛋白质印迹分析代表54 kDa蛋白带。它在N端的泛素样结构域（34％），RING指间结构域（IBR，65-69％）和C端的RING指结构域（ 56-57％）。D. melanogaster parkin的表达模式在发育阶段有所不同，通过竞争性RT-PCR测定，成人阶段的表达最高。根据胚胎的免疫染色，在晚期胚胎阶段，中枢神经系统（大脑和神经索）中的D. melanogaster parkin表达略高。黑色素帕金菌素在发育阶段有所不同，通过竞争性RT-PCR测定，成人阶段的表达最高。从胚胎的免疫染色来看，D。melanogaster parkin在胚胎晚期处于中枢神经系统（大脑和神经索）的表达水平略高。黑色素帕金菌素在发育阶段有所不同，通过竞争性RT-PCR测定，成人阶段的表达最高。根据胚胎的免疫染色，在晚期胚胎阶段，中枢神经系统（大脑和神经索）中的D. melanogaster parkin表达略高。