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SRP and Sec pathway leader peptides for antibody phage display and antibody fragment production in E. coli
New Biotechnology ( IF 5.4 ) Pub Date : 2008-06-01 , DOI: 10.1016/j.nbt.2008.01.001 Holger Thie 1 , Thomas Schirrmann , Matthias Paschke , Stefan Dübel , Michael Hust
New Biotechnology ( IF 5.4 ) Pub Date : 2008-06-01 , DOI: 10.1016/j.nbt.2008.01.001 Holger Thie 1 , Thomas Schirrmann , Matthias Paschke , Stefan Dübel , Michael Hust
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Antibody phage display is a key technology for the generation of recombinant (human) antibodies for research, diagnostics and therapy. Most antibody fragments can only be folded correctly in the oxidizing environment of the periplasm of Escherichia coli. A multitude of leader peptides has been used for secretion of antibody::pIII fusion proteins into the periplasm, but a systematic study of their impact on the performance of antibody phage display systems has not been reported so far. In this work we have analysed the influence of various leader peptides on antibody phage display efficiency and production yields of soluble antibody fragments. Four leader peptides using the Sec pathway (PelB, OmpA, PhoA and pIII) and three using the SRP pathway (DsbA, TorT and TolB) were compared. Both pathways are compatible with antibody phage display and the production of soluble antibody fragments. The applicability of the SRP pathway to antibody phage display and the production of functional scFvs is shown here for the first time.
中文翻译:
用于大肠杆菌中抗体噬菌体展示和抗体片段生产的 SRP 和 Sec 途径前导肽
抗体噬菌体展示是产生用于研究、诊断和治疗的重组(人)抗体的关键技术。大多数抗体片段只能在大肠杆菌周质的氧化环境中正确折叠。大量的前导肽已被用于将抗体::pIII 融合蛋白分泌到周质中,但到目前为止还没有关于它们对抗体噬菌体展示系统性能影响的系统研究的报道。在这项工作中,我们分析了各种前导肽对抗体噬菌体展示效率和可溶性抗体片段产量的影响。比较了使用 Sec 途径的四种前导肽(PelB、OmpA、PhoA 和 pIII)和三种使用 SRP 途径的前导肽(DsbA、TorT 和 TolB)。这两种途径都与抗体噬菌体展示和可溶性抗体片段的生产兼容。此处首次展示了 SRP 途径对抗体噬菌体展示和功能性 scFv 生产的适用性。
更新日期:2008-06-01
中文翻译:
用于大肠杆菌中抗体噬菌体展示和抗体片段生产的 SRP 和 Sec 途径前导肽
抗体噬菌体展示是产生用于研究、诊断和治疗的重组(人)抗体的关键技术。大多数抗体片段只能在大肠杆菌周质的氧化环境中正确折叠。大量的前导肽已被用于将抗体::pIII 融合蛋白分泌到周质中,但到目前为止还没有关于它们对抗体噬菌体展示系统性能影响的系统研究的报道。在这项工作中,我们分析了各种前导肽对抗体噬菌体展示效率和可溶性抗体片段产量的影响。比较了使用 Sec 途径的四种前导肽(PelB、OmpA、PhoA 和 pIII)和三种使用 SRP 途径的前导肽(DsbA、TorT 和 TolB)。这两种途径都与抗体噬菌体展示和可溶性抗体片段的生产兼容。此处首次展示了 SRP 途径对抗体噬菌体展示和功能性 scFv 生产的适用性。