Direct analysis of intact proteins on a chromatographic time scale is demonstrated on a modified linear ion trap mass spectrometer using sequential ion/ion reactions, electron transfer and proton transfer, to dissociate the sample and to convert the resulting peptide fragments to a mixture of singly and doubly charged species. Proteins are converted to gas-phase, multiply-charged, positive ions by electrospray ionization and then allowed to react with fluoranthene radical anions. Electron transfer to the multiply charged protein promotes random fragmentation of amide bonds along the protein backbone. Multiply charged fragment ions are then deprotonated in a second ion/ion reaction with even-electron benzoate anions. M/z values for the resulting singly and doubly charged ions are used to read a sequence of 15-40 amino acids at both the N-terminus and the C-terminus of the protein. This information, along with the measured mass of the intact protein, are employed to identify known proteins and to detect the presence of post-translational modifications. In this study, we analyze intact proteins from the Escherchia coli 70S ribosomal protein complex and identify 46 of the 55 known unique components in a single, 90 min, on-line, chromatography experiment. Truncated versions of the above proteins along with several post-translational modifications are also detected.

中文翻译：

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通过电子转移解离串联质谱法在色谱时间尺度上分析完整蛋白质

在改进的线性离子阱质谱仪上使用连续离子/离子反应、电子转移和质子转移，在色谱时间尺度上对完整蛋白质进行直接分析，以解离样品并将所得肽片段转化为单一和双电荷物种。通过电喷雾电离将蛋白质转化为气相多电荷正离子，然后使其与荧蒽自由基阴离子反应。向多电荷蛋白质的电子转移促进了沿着蛋白质骨架的酰胺键的随机断裂。然后在与偶电子苯甲酸阴离子的第二次离子/离子反应中将多电荷碎片离子去质子化。所得单电荷和双电荷离子的 M/z 值用于读取蛋白质 N 端和 C 端的 15-40 个氨基酸序列。该信息与完整蛋白质的测量质量一起用于识别已知蛋白质并检测翻译后修饰的存在。在这项研究中，我们分析了来自大肠杆菌 70S 核糖体蛋白质复合物的完整蛋白质，并在 90 分钟的单次在线色谱实验中鉴定了 55 种已知独特成分中的 46 种。还检测到上述蛋白质的截短形式以及几种翻译后修饰。用于鉴定已知蛋白质并检测翻译后修饰的存在。在这项研究中，我们分析了来自大肠杆菌 70S 核糖体蛋白质复合物的完整蛋白质，并在 90 分钟的单次在线色谱实验中鉴定了 55 种已知独特成分中的 46 种。还检测到上述蛋白质的截短形式以及几种翻译后修饰。用于鉴定已知蛋白质并检测翻译后修饰的存在。在这项研究中，我们分析了来自大肠杆菌 70S 核糖体蛋白质复合物的完整蛋白质，并在 90 分钟的单次在线色谱实验中鉴定了 55 种已知独特成分中的 46 种。还检测到上述蛋白质的截短形式以及几种翻译后修饰。