The preparation of purified, detergent-solubilized membrane proteins in a monodisperse and stable form is usually a prerequisite for investigation not only of their function but also for structural studies by X-ray crystallography and other approaches. Typically, it is necessary to explore a wide range of conditions, including detergent type, buffer pH, and the presence of additives such as glycerol, in order to identify those optimal for stability. Given the difficulty of expressing and purifying membrane proteins in large amounts, such explorations must ideally be performed on as small a scale as practicable. To achieve this objective in the UK Membrane Protein Structure Initiative, we have developed a rapid, economical, light-scattering assay of membrane protein aggregation that allows the testing of 48 buffer conditions in parallel on 6 protein targets, requiring less than 2 mg protein for each target. Testing of the assay on a number of unrelated membrane transporters has shown that it is of generic applicability. Proteins of sufficient purity for this plate-based assay are first rapidly prepared using simple affinity purification procedures performed in batch mode. Samples are then transferred by microdialysis into each of the conditions to be tested. Finally, attenuance at 340 nm is monitored in a 384-well plate using a plate reader. Optimal conditions for protein stability identified in the assay can then be exploited for the tailored purification of individual targets in as stable a form as possible.

中文翻译：

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膜蛋白稳定性的高通量分析。

通常，制备单分散且稳定形式的纯化的去污剂增溶的膜蛋白不仅是研究其功能的前提，而且是通过X射线晶体学和其他方法进行结构研究的先决条件。通常，有必要探索各种条件，包括去污剂类型，缓冲液pH值以及添加剂（如甘油）的存在，以便确定最适合稳定性的条件。考虑到大量表达和纯化膜蛋白的困难，理想地，这种探索必须在可行的小范围内进行。为了在“英国膜蛋白结构计划”中实现这一目标，我们开发了一种快速，经济，膜蛋白聚集的光散射测定法，可以在6个蛋白质靶标上并行测试48个缓冲液条件，每个靶标的蛋白质含量少于2 mg。在许多不相关的膜转运蛋白上对该测定法的测试表明，该测定法具有通用性。首先使用分批模式下执行的简单亲和纯化程序，快速制备出纯度足以用于此基于平板的测定的蛋白质。然后通过微透析将样品转移到每个要测试的条件中。最后，使用酶标仪在384孔板中监测340 nm处的衰减。然后可以利用在测定中确定的蛋白质稳定性的最佳条件，以尽可能稳定的形式定制纯化单个目标。每个靶标需要少于2 mg的蛋白质。在许多不相关的膜转运蛋白上对该测定法的测试表明，该测定法具有通用性。首先使用分批模式下执行的简单亲和纯化程序，快速制备出纯度足以用于此基于平板的测定的蛋白质。然后通过微透析将样品转移到每个要测试的条件中。最后，使用酶标仪在384孔板中监测340 nm处的衰减。然后可以利用在测定中确定的蛋白质稳定性的最佳条件，以尽可能稳定的形式定制纯化单个目标。每个靶标需要少于2 mg的蛋白质。在许多不相关的膜转运蛋白上对该测定法的测试表明，该测定法具有通用性。首先使用分批模式下执行的简单亲和纯化程序，快速制备出纯度足以用于此基于平板的测定的蛋白质。然后通过微透析将样品转移到每个要测试的条件中。最后，使用酶标仪在384孔板中监测340 nm处的衰减。然后可以利用在测定中确定的蛋白质稳定性的最佳条件，以尽可能稳定的形式定制纯化单个目标。首先使用分批模式下执行的简单亲和纯化程序，快速制备出纯度足以用于此基于平板的测定的蛋白质。然后通过微透析将样品转移到每个要测试的条件中。最后，使用酶标仪在384孔板中监测340 nm处的衰减。然后可以利用在测定中确定的蛋白质稳定性的最佳条件，以尽可能稳定的形式定制纯化单个目标。首先使用分批模式下执行的简单亲和纯化程序，快速制备出纯度足以用于此基于平板的测定的蛋白质。然后通过微透析将样品转移到每个要测试的条件中。最后，使用酶标仪在384孔板中监测340 nm处的衰减。然后可以利用在测定中确定的蛋白质稳定性的最佳条件，以尽可能稳定的形式定制纯化单个目标。