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Daptomycin, a last-resort antibiotic, binds ribosomal protein S19 in humans.
Proteome Science ( IF 2 ) Pub Date : 2017-07-07 , DOI: 10.1186/s12953-017-0124-2
Michael P Gotsbacher 1, 2 , Sungmin Cho 3 , Ho Jeong Kwon 3 , Peter Karuso 1
Affiliation  

BACKGROUND Daptomycin is a recently introduced, last-resort antibiotic that displays a unique mode of action against Gram-positive bacteria that is not fully understood. Several bacterial targets have been proposed but no human binding partner is known. METHODS In the present study we tested daptomycin in cell viability and proliferation assays against six human cell lines, describe the synthesis of biotinylated and fluorescently labeled analogues of daptomycin. Biotinylated daptomycin was used as bait to isolate the human binding partner by the application of reverse chemical proteomics using T7 phage display of five human tumor cDNA libraries. The interaction between the rescued protein and daptomycin was validated via siRNA knockdown, DARTS assay and immunocytochemistry. RESULTS We have found that daptomycin possesses selective growth inhibition of some cancer cell lines, especially MCF7. The unbiased interrogation of human cDNA libraries, displayed on bacteriophage T7, revealed a single human target of daptomycin; ribosomal protein S19. Using a drug affinity responsive target stability (DARTS) assay in vitro, we show that daptomycin stabilizes RPS19 toward pronase. Fluorescently labeled daptomycin stained specific structures in HeLa cells and co-localized with a RPS19 antibody. CONCLUSION This study provides, for the first time, a human protein target of daptomycin and identifies RPS19 as a possible anticancer drug target for the development of new pharmacological applications and research.

中文翻译:

达托霉素是一种最后的抗生素,它与人的核糖体蛋白S19结合。

背景技术达托霉素是最近引入的最后一种抗生素,其显示出针对革兰氏阳性细菌的独特作用方式,但尚未完全了解。已经提出了几种细菌靶标,但是尚无人类结合伴侣。方法在本研究中,我们在针对六种人类细胞系的细胞活力和增殖试验中测试了达托霉素,描述了达托霉素生物素化和荧光标记类似物的合成。使用生物素化的达托霉素作为诱饵,通过使用五个人类肿瘤cDNA文库的T7噬菌体展示,通过反向化学蛋白质组学,分离出人类结合伴侣。救援的蛋白质和达托霉素之间的相互作用已通过siRNA敲低,DARTS分析和免疫细胞化学验证。结果我们发现达托霉素对某些癌细胞系,特别是MCF7具有选择性生长抑制作用。在噬菌体T7上展示的人类cDNA文库的无偏查询显示了达托霉素的单个人类靶标;核糖体蛋白S19。在体外使用药物亲和力响应靶标稳定性(DARTS)分析,我们显示达托霉素使RPS19稳定于链酶。荧光标记的达托霉素可染色HeLa细胞中的特定结构,并与RPS19抗体共定位。结论本研究首次提供了达托霉素的人类蛋白质靶标,并确定RPS19作为开发新药理学应用和研究的可能的抗癌药物靶标。展示在噬菌体T7上,揭示了达托霉素的单个人类靶标;核糖体蛋白S19。在体外使用药物亲和力响应靶标稳定性(DARTS)分析,我们显示达托霉素使RPS19稳定于链酶。荧光标记的达托霉素可染色HeLa细胞中的特定结构,并与RPS19抗体共定位。结论本研究首次提供了达托霉素的人类蛋白质靶标,并确定RPS19作为开发新药理学应用和研究的可能的抗癌药物靶标。展示在噬菌体T7上,揭示了达托霉素的单个人类靶标;核糖体蛋白S19。在体外使用药物亲和力响应靶标稳定性(DARTS)分析,我们显示达托霉素使RPS19稳定于链酶。荧光标记的达托霉素可染色HeLa细胞中的特定结构,并与RPS19抗体共定位。结论本研究首次提供了达托霉素的人类蛋白质靶标,并确定RPS19作为开发新药理学应用和研究的可能的抗癌药物靶标。荧光标记的达托霉素可染色HeLa细胞中的特定结构,并与RPS19抗体共定位。结论本研究首次提供了达托霉素的人类蛋白质靶标,并确定RPS19作为开发新药理学应用和研究的可能的抗癌药物靶标。荧光标记的达托霉素可染色HeLa细胞中的特定结构,并与RPS19抗体共定位。结论本研究首次提供了达托霉素的人类蛋白质靶标,并确定RPS19作为开发新药理学应用和研究的可能的抗癌药物靶标。
更新日期:2019-11-01
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