microRNAs(简称miRNA)是一类进化上高度守的小分子非编码RNA,miRNA长度大约22nt左右,具有转录后调控基因表达的功能。表达miRNA的基因可能位于功能基因编码区或非编码区,可成簇表达或独立表达。每个miRNA可以调控多个(甚至上百个)靶基因,而特定靶基因也可以同时被多个miRNA 调节。
一. miRNA生成过程
1.在细胞核内,基因组DNA 转录生成较长的pri-microRNA,长度从几百到几千个碱基不等,带有5‘帽子和3’polyA尾巴,以及1到数个发夹径环结构。
2. pri-microRNA被Drosha 酶切割形成长度大约70-100 碱基大小的、具发夹结构的pre-microRNA。
3. pre-miRNA被核输出蛋白exportin5 转运到细胞质,再被胞浆中的Dicer 酶切割形成19-23nt 大小的成熟的miRNAs 产物。
二. miRNA作用机制
miRNA作用机制主要表现为降解或抑制靶基因。miRNA5’端2-8个碱基被称为miRNA种子序列。通过种子序列与靶mRNA 的5'-UTR和3'-UTRˊ区实现。通过完全配对,降解mRNA抑制蛋白,qRT-PCR检测mRNA,WB检测蛋白都呈现明显的下调。通过部分配对,通过抑制翻译抑制蛋白,qRT-PCR检测mRNA没有变化,WB检测蛋白呈现明显下调。
三.如何预测miRNA靶基因
常用的microRNA数据库和预测软件非常多,下面以常用数据库为例,详细叙述预测microRNA与靶基因的互作的网站,希望对microRNA的研究者有所帮助。
数据库miRPathDB:可查询参与通路内调控的miRNAs,包含了人、鼠两类数据。不仅可以预测miRNA的靶基因,还可以通过GO、KEGG数据库预测其可能参与的信号通路。
网址: https://mpd.bioinf.uni-sb.de/overview.html
数据库Targetscan,既可以查询miRNA的靶基因,又可以查询基因可能互作miRNA。
网址: http://www.targetscan.org/vert_71/
(1)选择查询物种,输入mir-21-5p名称。
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