浙江大学吴建祥等：凤果花叶病毒高灵敏度血清学检测技术

目的：

建立基于单克隆抗体的检测番茄等植物中凤果花叶病毒（PepMV）的血清学方法，为PepMV 的田间调查和诊断及其科学防控提供快速实用的检测技术。

创新点：

首次制备了抗PepMV 的高度特异和灵敏的单克隆抗体，并利用制备的单抗建立了3 种能特异且灵敏地检测PepMV 的血清学方法。

方法：

以差速离心方法提纯的PepMV 粒子作为免疫原免疫BALB/c 小鼠，通过杂交瘤技术获得了能稳定传代并分泌PepMV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株；杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔获得单克隆抗体腹水，并以制备单抗为核心，根据血清学原理建立检测植物中PepMV 的双抗夹心酶联免疫吸附试验（DAS-ELISA）、斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）和组织印迹酶联免疫吸附试验（Tissue print-ELISA）三种血清学检测方法；利用田间番茄样品分析建立的血清学方法检测PepMV 的有效性。

结论：

利用杂交瘤技术获得了6 株能分泌高度特异灵敏PepMV 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以分泌的单抗为核心建立了检测植株中PepMV 的DASELISA、Dot-ELISA 和Tissue print-ELISA 三种高度灵敏的血清学新技术。三种建立的血清学技术检测感染PepMV 的番茄植株均呈强阳性反应，而检测健康番茄及感染其他5 种植物病毒的植株呈阴性反应，且DAS-ELISA 和Dot-ELISA 血清学技术检测番茄病叶粗提液的灵敏度分别达到1:1 310 720 和1:20 480 倍稀释(质量体积比，g/mL)。田间样品检测结果发现，建立的血清学技术的检测结果与反转录聚合酶链反应（RT-PCR）的检测结果一致，表明建立的血清学方法可有效地用于植物中PepMV 的检测。同时，本研究首次发现PepMV 已在我国云南番茄作物上发生流行。PepMV 单克隆抗体的制备及其灵敏血清学检测方法的建立有益于PepMV 的田间调查和诊断及其科学防控。

关键词：

凤果花叶病毒；单克隆抗体；血清学方法；双抗夹心酶联免疫吸附试验（DAS-ELISA）；斑点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）；组织印迹酶联免疫吸附试验（Tissue print-ELISA）

作者： 

本文引用格式：

Wan-qin HE, Jia-yu WU, Yi-yi REN, Xue-ping ZHOU, Song-bai ZHANG, Ya-juan QIAN, Fang-fang LI, Jian-xiang WU, 2020. Highly sensitive serological approaches for Pepino mosaic virus detection. Journal of Zhejiang University-Science B (Biomedicine & Biotechnology), 21(10):811-822. http://doi.org/10.1631/jzus.B2000255

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