HPV检测的新靶点—HPV E6/E7 mRNA检测

人乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus，HPV）是一种常见的性传播病毒，而高危型HPV与宫颈癌的发生密切相关。今年四月份，我国国家药品监督管理局批准九价宫颈癌疫苗在内地上市，这使得大家对于HPV的关注度越来越高。目前世界范围内，针对九种HPV亚型（6、11、16、18、31、3、45、52及58型）的九价HPV疫苗，是预防HPV感染功能最全面的疫苗，能预防90%的宫颈癌。

虽然HPV与宫颈癌密切相关，但并非感染了HPV，就一定会发生宫颈癌。通常，从HPV感染到宫颈癌的发生，会经历7-15年的漫长过程。在感染的2年内，90%的感染者的HPV会被自身免疫系统所清除，只有大约10%者会持续感染。持续性感染高危型HPV，会造成宫颈上皮细胞的反复损伤、修复增生，从而导致宫颈癌前病变及宫颈癌。

根据病变程度的不同，宫颈癌前病变可分为低级别鳞状上皮内病变(Low- grade Squamous Intraepithelial Lesion,LSIL)和高级别鳞状上皮内病变(High-grade Squamous Intraepithelial Lesion,HSIL)。绝大多数LSIL会消退或不发生进展，即便是HSIL（CIN2），也有60%会发生逆转。

那么，HPV为什么会导致癌前病变及宫颈癌呢？这就需要聊聊HPV本身。

HPV基因组是双链环状DNA，根据功能可以把HPV基因组分为3个区：早期转录区（E区）、晚期转录区（L区）和非转录区(控制区)。E区分别编码为E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8等8个早期蛋白。L区包括L1、L2基因，编码组成病毒衣壳的结构蛋白L1和L2（参见图1）。

研究表明，E6、E7基因产物可以与p53和pRB相互作用。E6蛋白通过E6-AP能特异性结合P53蛋白形成复合物，促使P53蛋白快速降解，导致细胞周期失控，其效应等同于P53突变。E7蛋白和pRB有高亲和性，使E2F和pRB复合物解离，使细胞周期失控而发生永生化。所以E6、E7 是癌基因（参见图2），它们的表达产物具有致癌作用。

根据E6、E7和L1基因序列可对HPV进行分型（基因型，genotype） 。根据致宫颈癌和癌前病变的相关性，可以把HPV分为高危型（high-risk）和低危型（low-risk）。低危型包括HPV6、11、42、43、44、CP8304。高危型包括HPV16、18、31、33、34、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、70。虽然高危型HPV与宫颈癌相关性更高，但其中的某些基因型在宫颈癌中却很少出现，反而在鳞状上皮内病变（squamous intraepithelial lesions,SILs）中较为常见；同样，低危型HPV虽然与宫颈癌相关性较低，但偶然也可见于宫颈癌。

接下来的问题是，我们如何知道是否感染了HPV？如果感染了，是低危型还是高危型？下面就聊一聊HPV的检测。

HPV通常存在于宫颈上皮组织中，我们需要通过搔刮或活检得到宫颈脱落细胞或宫颈组织，然后进行核酸提取，之后通过基于PCR的方法检测HPV的核酸。正常人宫颈脱落细胞或宫颈组织中不存在HPV核酸，如果检测到HPV的核酸，就说明有HPV感染。目前应用比较广泛的HPV核酸检测靶点是L1区DNA， 但L1区DNA在HPV基因整合过程中有可能丢失，从而造成假阴性的结果。此外，如前所述，并不是所有感染HPV的人均会发生宫颈癌，有些患者是一过性感染，发生宫颈癌的几率很小，只有持续性感染的患者才易于发生宫颈癌。而这种检测HPV L1区DNA的方法无法很好地区分一过性感染和持续性感染，因此，正逐渐被检测E6/E7 mRNA的方法所取代。

E6/E7 基因在整合过程中始终保守，通过检测E6/E7的转录产物E6/E7mRNA，不仅可以检测出HPV病毒是否感染，更可以很好的区分一过性感染和持续性感染，从而减轻一过性感染者的心理负担。检测到E6/E7mRNA还可提示HPV癌基因已经转录、表达，从而评估宫颈癌变的风险与发展趋势，为后续的治疗提供更好的支持。