实验百宝箱-基础篇-感受态细胞的制备
（一）受体菌的培养
（1）在没有抗性的LB培养基中划线，放在37°培养箱，过夜培养；
(2) 从LB平板上挑取E. coli DH5α单菌落，接种于5mL LB液体培养基中，37℃下振荡培养过夜（12h左右）;
(3)将该菌种悬液以1:100的比例接种，取1.oo ml 菌液转接到100mL LB液体培养基中，37℃振荡培养3～4h至OD600在0.6-0.8之间;
（二） 感受态细胞的制备
（注意：以下操作在超净工作台完成。）
(1)将菌液转入50mL离心管中，冰上放置5-10min;
(2)在4℃下，4000r/min离心 10min。弃去上清，将管倒置1min以便培养液流尽;
(3)用冰上预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液10mL轻轻悬浮细胞，冰上放置30min;
(4)4℃ 4000r/min离心10min，弃去上清，加入2mL预冷的0.1mol/L的CaCl2 溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置（务必冰上放置）;
（注意：以上操作完成了新鲜感受态细胞的制备）
（三）感受态细胞的分装与冻存
(1)在10mL制备好的感受态细胞中加入10mL30%甘油（即1:1体积，甘油终浓度15%）。
(2)将此感受态细胞分装成每份200μL (1.5mL dorf管)，液氮速冻，快速转入-80℃冰箱保存。（如果没有液氮，可以将分装的感受态细胞直接转入-70℃冰箱保存。）
所需试剂：LB液体培养基，LB无抗固体培养基，0.1mol/L CaCl2 ，30%甘油母液
注意问题：
培养基得现配现有，防止污染；试剂一定要现配并且经过灭菌的；
试管也要保持无菌的状态；
为保证细菌的活性，大摇是，OD值一定要在0.6-0.8见，所以2个小时以后，要严密监测细菌的OD值；
感受态细胞的制备务必要在超净台中操作，而且超净台要提前灭菌消毒；
总之，所有的所以，就是要保证感受态的活性及不被污染。