之前研究发现,SPT6L是一种转录延伸因子,可以与Pol II相互作用,并强化转录的延长过程。最近的酵母突变体的转录组分析揭示了它在转录起始过程中的潜在作用。然而,具体的分子机制还没有阐明。为了研究这种机制,作者在拟南芥spt6l突变体中过表达ProSPT6L:SPT6L-GFP,通过全基因组的ChIP-seq,发现SPT6L主要集中在基因的转录区,与Pol II在基因上的分布规律十分相似,并且在spt6l突变体中,基因的表达水平和Pol II在基因上的积累量均会降低。这些结果表明SPT6L在基因转录过程中扮演着重要角色。
图1. SPT6L促进基因转录。
当破坏SPT6L的SH2 domain(可以与NRPB1相互作用区域),可以发现SPT6LΔtSH2仍可以部分恢复spt6l突变体的表型,并且能够检测到SPT6LΔtSH2其在基因转录起始位点的结合,说明SPT6L与基因的结合能力是不依赖于Pol II的。ChIP-seq也表明SPT6LΔtSH2在基因上的结合位点位于Pol II结合位点的上游,暗示着SPT6LΔtSH2可能会在转录起始阶段促进Pol II的招募。
图2. SPT6L以不依赖RNAPII的模式富集于转录起始位置。
为了寻找SPT6L与基因结合的功能区域,作者在spt6l突变体中过表达缺失不同的domain 的SPT6LΔtSH2载体,ChIP-seq鉴定出HtH和YqgF 结构域是SPT6LΔtSH2与基因结合的功能区域,植株表型恢复情况也表明HtH和YqgF是SPT6LΔtSH2恢复植株表型的重要区域。
图3. HtH和YqgF是SPT6L的重要功能结构域。
通过具体分析热激相关基因,作者发现在热激5分钟的时候,HSP70的表达量即显著增加,ChIP表明此时SPT6L的积累量在基因转录起始位置处有峰值,然而RNAPII和RNAPIIS2P在转录起始位置下游处有峰值。另外两个基因HSFA7A和HSFB2B基因在热激处理后7.5分钟的时候,ChIP实验也有类似的结果,即SPT6L的积累量在转录起始位置处有个峰,然而RNAPII 和RNAPIIS2P在转录起始位置下游处有峰值。这些结果表明,在热激处理后,SPT6L很可能先被招募到这些热激基因转录起始位置,并且这个过程不依赖Pol II。
本文揭示了SPT6L在基因转录起始过程中的分子机制,为深入了解拟南芥转录分子机制提供了数据。
原文链接:https://doi.org/10.1093/nar/gkz465
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