文献分享：SRSF2 mutation reduces polycythemia and Impairs hematopoietic progenitor functions in JAK2V617F-driven myeloproliferative neoplasm

SRSF2突变减轻JAK2V617F突变诱导骨髓增殖性肿瘤的真性红细胞增多症及损害造血祖细胞功能

（22级硕士路娅婷）

一、作者介绍

Golam Mohi，生物化学和分子遗传学教授，博士毕业于东京大学分子细胞生物学专业，博士后在哈佛医学院从事癌症生物学研究。主要研究方向为细胞信号（Janus家庭的非酪氨酸受体蛋白激酶激活与各类细胞因子的响应）、干细胞生物学及血液癌症（JAK2VF驱动的MPN发病机制等）。在NATURE COMMUNICATIONS、LEUKEMIA等杂志发表多篇论文。

二、研究背景

1. SRSF2的作用

SRSF2是涉及RNA剪接的蛋白质，属于富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子家族成员之一。SRSF2在真核生物的前体mRNA剪接过程中起关键作用，通过识别和结合到mRNA前体的内含子区域，促进剪接体的形成和剪接反应进行，对维持胸腺、骨髓等造血系统正常发育以及肝脏代谢稳态至关重要。

2. SRSF2突变情况

涉及脯氨酸95残基（SRSF2 P95H）的SRSF2突变在多种骨髓肿瘤患者中被发现，包括骨髓增生异常综合征（MDS）、慢性粒单核细胞白血病（CMML）、MPN和急性髓性白血病（AML）。在MPN中，SRSF2突变在PV和ET中少见，但在MF患者中存在且与不良预后具有相关性。已有研究表明Srsf2 P95H突变体在小鼠造血中的表达导致骨髓发育不良和造血干细胞功能受损。

三、研究结果

（一）Srsf2P95H突变减轻Jak2V617F/+小鼠的红细胞增多症表型，并且不促进骨髓纤维化进程

与Jak2V617F/+小鼠相比，Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠的白细胞（WBC）、中性粒细胞（NE）、血小板（PLT）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（HCT）等指标有不同程度变化，如WBC、NE、PLT等指标在两组间无显著差异，而Hb、HCT等指标在Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠中降低；骨髓切片的瑞氏染色（BM Retic）和苏木精 - 伊红染色（BM H&E）结果显示Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠与Jak2V617F/+小鼠相比，巨核细胞数量和网状纤维化程度均有降低。

（二）Srsf2P95H和Jak2V617F共突变对小鼠造血干/祖细胞和前体细胞的影响

与对照组相比，Jak2V617F/+小鼠骨髓中造血干细胞（HSC）、多能祖细胞（MPP）、短期造血干细胞（ST - HSC）、长期造血干细胞（LT - HSC）、粒细胞 - 巨噬细胞祖细胞（GMP）、共同髓系祖细胞（CMP）、巨核细胞 - 红系祖细胞（MEP）等亚群比例发生变化，如LT - HSC在Jak2V617F/+小鼠中比例增加；而Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠与Jak2V617F/+小鼠相比，这些亚群比例又有进一步改变，如LT - HSC比例降低等。

Jak2V617F/+小鼠骨髓中红细胞前体细胞（Ter119+/CD71+）相比对照小鼠显著增加，而Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠骨髓中红细胞前体细胞相比Jak2V617F/+小鼠显著减少。同时，Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠中Epo - independent CFU - E colonies（在没有红细胞生成素情况下能够形成的红细胞集落形成单位）也减少。 

（三）Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠表型具有细胞自主性

11Gy 照射后，将 WT 或 Mx1Cre（对照）小鼠进行骨髓移植（BMT），4 周后对 Mx1Cre; Srsf2P95H/+、Mx1Cre; Jak2V617F/+、Mx1Cre; Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ 小鼠在 36 周时进行分析（部分小鼠在移植后给予 pI - pC 诱导）。结果显示，与对照相比，各突变组小鼠的外周血白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、脾脏重量等指标有不同程度变化，如 Jak2V617F/+ 小鼠 RBC、Hb、HCT 等增加，而 Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ 小鼠这些指标较 Jak2V617F/+ 小鼠有所降低；骨髓中造血干 / 祖细胞亚群比例也发生相应改变，如 LT - HSC 在 Jak2V617F/+ 小鼠中比例增加，在 Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ 小鼠中比例降低等。

对脾脏细胞中造血干/祖细胞亚群比例分析发现，与对照相比，各突变组在脾脏细胞中的比例也有变化，如Jak2V617F/+小鼠脾脏细胞中ST - HSC比例增加，而Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠脾脏细胞中ST - HSC比例较Jak2V617F/+小鼠降低等，进一步证明了Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠表型的细胞自主性。

（四）Srsf2P95H突变体对Jak2V617F造血干祖细胞（HSPC）竞争力的影响

11Gy照射后，将Mx1Cre; Jak2V617F/+ GFP+或Mx1Cre; Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ GFP+小鼠的细胞与WT C57BL/6小鼠（非GFP）细胞按1:1比例混合后进行骨髓移植，每4周通过流式细胞术分析外周血（PB）和骨髓（BM）中不同细胞类型的比例，持续16周。与Jak2V617F/+ GFP+细胞相比，Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ GFP+细胞在外周血和骨髓中的比例逐渐降低，如外周血中Ter119+细胞在Jak2V617F/+ GFP+细胞中的比例较高，而在Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ GFP+细胞中的比例较低；骨髓中LSK细胞在Jak2V617F/+ GFP+细胞中的比例高于Srsf2P95H/+Jak2V617F/+ GFP+细胞等，表明Srsf2P95H突变体降低了Jak2V617F HSPC的竞争力。

（五）Srsf2P95H突变体诱导的S100A9过表达对Jak2V617F/+小鼠红细胞生成的影响

已有研究表明Srsf2P95H/+小鼠造血祖细胞中S100A8和S100A9 mRNA表达增加，且与红系分化缺陷及MDS发病机制有关。假设Srsf2P95H突变体诱导的S100A9过表达可能影响Jak2V617F/+小鼠的红细胞生成。对Jak2V617F/+小鼠和Srsf2P95H/+Jak2V617F/+小鼠骨髓细胞中S100A8和S100A9 mRNA表达检测发现，Srsf2P95H/+小鼠中S100A9 mRNA表达增加。将Jak2V617F/+小鼠骨髓细胞用表达载体或S100A9的逆转录病毒转导后进行骨髓移植，分析发现，与转导载体的Jak2V617F/+小鼠相比，转导S100A9的Jak2V617F/+小鼠外周血中红细胞（RBC）、白细胞（WBC）、中性粒细胞（NE）、血红蛋白（Hb）、红细胞压积（HCT）、血小板（PLT）等指标发生变化，如RBC、Hb、HCT等降低；骨髓和脾脏中Ter119+细胞比例降低；骨髓中粒细胞 - 巨噬细胞集落形成单位（CFU - GM）和红细胞爆式集落形成单位（BFU - E）数量减少，表明S100A9过表达减少了Jak2V617F/+小鼠骨髓和红细胞集落形成，进而影响红细胞生成。

四、研究讨论

1. Concurrent Expression of SRSF2P95H and JAK2V617F Mutants Reduces polycythemia；

2. Concurrent Expression of SRSF2P95H and JAK2V617F Mutants Impairs hematopoietic progenitor functions；

3. SRSF2P95H Inhibits the Development of Myelofibrosis.