Saliva is possibly the easiest biofluid to analyse and, despite its simple composition, contains relevant metabolic information. In this work, we explored the potential of the volatile composition of saliva samples as biosignatures for breast cancer (BC) non-invasive diagnosis. To achieve this, 106 saliva samples of BC patients and controls in two distinct geographic regions in Portugal and India were extracted and analysed using optimised headspace solid-phase microextraction gas chromatography mass spectrometry (HS-SPME/GC-MS, 2 mL acidified saliva containing 10% NaCl, stirred (800 rpm) for 45 min at 38 °C and using the CAR/PDMS SPME fibre) followed by multivariate statistical analysis (MVSA). Over 120 volatiles from distinct chemical classes, with significant variations among the groups, were identified. MVSA retrieved a limited number of volatiles, viz. 3-methyl-pentanoic acid, 4-methyl-pentanoic acid, phenol and p-tert-butyl-phenol (Portuguese samples) and acetic, propanoic, benzoic acids, 1,2-decanediol, 2-decanone, and decanal (Indian samples), statistically relevant for the discrimination of BC patients in the populations analysed. This work defines an experimental layout, HS-SPME/GC-MS followed by MVSA, suitable to characterise volatile fingerprints for saliva as putative biosignatures for BC non-invasive diagnosis. Here, it was applied to BC samples from geographically distant populations and good disease separation was obtained. Further studies using larger cohorts are therefore very pertinent to challenge and strengthen this proof-of-concept study.

中文翻译：

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唾液挥发物筛查推定的乳腺癌鉴别：一项涉及地理上遥远人群的探索性研究

唾液可能是最容易分析的生物流体，尽管其成分简单，但仍包含相关的代谢信息。在这项工作中，我们探索了唾液样品的挥发性成分作为乳腺癌（BC）非侵入性诊断的生物特征的潜力。为此，使用优化的顶空固相微萃取气相色谱质谱仪（HS-SPME / GC-MS，2 mL酸化唾液）提取并分析了葡萄牙和印度两个不同地理区域的106例BC患者和对照的唾液样本。 10％NaCl，在38°C下使用CAR / PDMS SPME纤维搅拌（800 rpm）45分钟，然后进行多元统计分析（MVSA）。鉴定出了来自不同化学类别的120多种挥发物，各组之间的差异很大。MVSA检索了有限数量的挥发物，即。3-甲基戊酸，4-甲基戊酸，苯酚和对叔丁基苯酚（葡萄牙样品）以及乙酸，丙酸，苯甲酸，1,2-癸二醇，2-癸酮和癸醛（印度样品） ），在所分析的人群中对BC患者的歧视具有统计学意义。这项工作定义了一个实验布局，即HS-SPME / GC-MS，然后是MVSA，适用于表征唾液的挥发性指纹作为BC非侵入性诊断的推定生物特征。在这里，它被应用于来自地理上遥远的人群的BC样本，并获得了良好的疾病分离效果。因此，使用更大队列的进一步研究与挑战和加强这一概念验证研究非常相关。苯酚和对叔丁基苯酚（葡萄牙样品）以及乙酸，丙酸，苯甲酸，1,2-癸二醇，2-癸烷和癸醛（印度样品），在统计学上与所分析人群中BC患者的辨别能力相关。这项工作定义了一个实验布局，即HS-SPME / GC-MS，然后是MVSA，适用于表征唾液的挥发性指纹作为BC非侵入性诊断的推定生物特征。在这里，它被应用于来自地理上遥远的人群的BC样本，并获得了良好的疾病分离效果。因此，使用更大队列的进一步研究与挑战和加强这一概念验证研究非常相关。苯酚和对叔丁基苯酚（葡萄牙样品）以及乙酸，丙酸，苯甲酸，1,2-癸二醇，2-癸烷和癸醛（印度样品），在统计学上与所分析人群中BC患者的辨别能力相关。这项工作定义了一个实验布局，即HS-SPME / GC-MS，然后是MVSA，适用于表征唾液的挥发性指纹作为BC非侵入性诊断的推定生物特征。在这里，它被应用于来自地理上遥远的人群的BC样本，并获得了良好的疾病分离效果。因此，使用更大队列的进一步研究与挑战和加强这一概念验证研究非常相关。在分析人群中对BC患者的歧视具有统计学意义。这项工作定义了一个实验布局，即HS-SPME / GC-MS，然后是MVSA，适用于表征唾液的挥发性指纹作为BC非侵入性诊断的推定生物特征。在这里，它被应用于来自地理上遥远的人群的BC样本，并获得了良好的疾病分离效果。因此，使用更大队列的进一步研究与挑战和加强这一概念验证研究非常相关。在分析人群中对BC患者的歧视具有统计学意义。这项工作定义了一个实验布局，即HS-SPME / GC-MS，然后是MVSA，适用于表征唾液的挥发性指纹作为BC非侵入性诊断的推定生物特征。在这里，它被应用于来自地理上遥远的人群的BC样本，并获得了良好的疾病分离效果。因此，使用更大队列的进一步研究与挑战和加强这一概念验证研究非常相关。