Isoprenoid cytokinins play a number of crucial roles in the regulation of plant growth and development. To study cytokinin receptor properties in plants, we designed and prepared fluorescent derivatives of 6-[(3-methylbut-2-en-1-yl)amino]purine (N6-isopentenyladenine, iP) with several fluorescent labels attached to the C2 or N9 atom of the purine moiety via a 2- or 6-carbon linker. The fluorescent labels included dansyl (DS), fluorescein (FC), 7-nitrobenzofurazan (NBD), rhodamine B (RhoB), coumarin (Cou), 7-(diethylamino)coumarin (DEAC) and cyanine 5 dye (Cy5). All prepared compounds were screened for affinity for the Arabidopsis thaliana cytokinin receptor (CRE1/AHK4). Although the attachment of the fluorescent labels to iP via the linkers mostly disrupted binding to the receptor, several fluorescent derivatives interacted well. For this reason, three derivatives, two rhodamine B and one 4-chloro-7-nitrobenzofurazan labeled iP were tested for their interaction with CRE1/AHK4 and Zea mays cytokinin receptors in detail. We further showed that the three derivatives were able to activate transcription of cytokinin response regulator ARR5 in Arabidopsis seedlings. The activity of fluorescently labeled cytokinins was compared with corresponding 6-dimethylaminopurine fluorescently labeled negative controls. Selected rhodamine B C2-labeled compounds 17, 18 and 4-chloro-7-nitrobenzofurazan N9-labeled compound 28 and their respective negative controls (19, 20 and 29, respectively) were used for in planta staining experiments in Arabidopsis thaliana cell suspension culture using live cell confocal microscopy.

中文翻译：

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荧光标记的类异戊二烯细胞分裂素的设计、合成和感知

类异戊二烯细胞分裂素在植物生长和发育的调节中起许多关键作用。为了研究植物中细胞分裂素受体的特性，我们设计并制备了 6-[(3-methylbut-2-en-1-yl)amino]purine (N6-isopentenyladenine, iP) 的荧光衍生物，其中几个荧光标记连接到 C2 或嘌呤部分的 N9 原子，通过 2 或 6 碳连接器。荧光标记包括丹磺酰 (DS)、荧光素 (FC)、7-硝基苯并呋喃 (NBD)、罗丹明 B (RhoB)、香豆素 (Cou)、7-(二乙氨基)香豆素 (DEAC) 和花青 5 染料 (Cy5)。筛选所有制备的化合物对拟南芥细胞分裂素受体 (CRE1/AHK4) 的亲和力。虽然荧光标记通过接头与 iP 的连接主要破坏了与受体的结合，但几种荧光衍生物相互作用良好。为此原因，详细测试了三种衍生物，即两种罗丹明 B 和一种 4-氯-7-硝基苯并呋喃标记 iP 与 CRE1/AHK4 和玉米细胞分裂素受体的相互作用。我们进一步表明，这三种衍生物能够激活拟南芥幼苗中细胞分裂素反应调节剂 ARR5 的转录。将荧光标记的细胞分裂素的活性与相应的 6-二甲氨基嘌呤荧光标记的阴性对照进行比较。选定的罗丹明 B C2 标记的化合物 17、18 和 4-氯-7-硝基苯并呋咱 N9 标记的化合物 28 及其各自的阴性对照（分别为 19、20 和 29）用于拟南芥细胞悬浮培养的植物染色实验使用活细胞共聚焦显微镜。详细测试了两种罗丹明 B 和一种 4-氯-7-硝基苯并呋喃标记 iP 与 CRE1/AHK4 和玉米细胞分裂素受体的相互作用。我们进一步表明，这三种衍生物能够激活拟南芥幼苗中细胞分裂素反应调节剂 ARR5 的转录。将荧光标记的细胞分裂素的活性与相应的 6-二甲氨基嘌呤荧光标记的阴性对照进行比较。选定的罗丹明 B C2 标记的化合物 17、18 和 4-氯-7-硝基苯并呋咱 N9 标记的化合物 28 及其各自的阴性对照（分别为 19、20 和 29）用于拟南芥细胞悬浮培养的植物染色实验使用活细胞共聚焦显微镜。详细测试了两种罗丹明 B 和一种 4-氯-7-硝基苯并呋喃标记 iP 与 CRE1/AHK4 和玉米细胞分裂素受体的相互作用。我们进一步表明，这三种衍生物能够激活拟南芥幼苗中细胞分裂素反应调节剂 ARR5 的转录。将荧光标记的细胞分裂素的活性与相应的 6-二甲氨基嘌呤荧光标记的阴性对照进行比较。选定的罗丹明 B C2 标记的化合物 17、18 和 4-氯-7-硝基苯并呋咱 N9 标记的化合物 28 及其各自的阴性对照（分别为 19、20 和 29）用于拟南芥细胞悬浮培养的植物染色实验使用活细胞共聚焦显微镜。我们进一步表明，这三种衍生物能够激活拟南芥幼苗中细胞分裂素反应调节剂 ARR5 的转录。将荧光标记的细胞分裂素的活性与相应的 6-二甲氨基嘌呤荧光标记的阴性对照进行比较。选定的罗丹明 B C2 标记的化合物 17、18 和 4-氯-7-硝基苯并呋咱 N9 标记的化合物 28 及其各自的阴性对照（分别为 19、20 和 29）用于拟南芥细胞悬浮培养的植物染色实验使用活细胞共聚焦显微镜。我们进一步表明，这三种衍生物能够激活拟南芥幼苗中细胞分裂素反应调节剂 ARR5 的转录。将荧光标记的细胞分裂素的活性与相应的 6-二甲氨基嘌呤荧光标记的阴性对照进行比较。选定的罗丹明 B C2 标记的化合物 17、18 和 4-氯-7-硝基苯并呋咱 N9 标记的化合物 28 及其各自的阴性对照（分别为 19、20 和 29）用于拟南芥细胞悬浮培养的植物染色实验使用活细胞共聚焦显微镜。