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Functional characterisation of G protein-coupled receptors
Methods ( IF 4.8 ) Pub Date : 2018-09-01 , DOI: 10.1016/j.ymeth.2018.02.018 Romez Uddin , John Simms , David Poyner
Methods ( IF 4.8 ) Pub Date : 2018-09-01 , DOI: 10.1016/j.ymeth.2018.02.018 Romez Uddin , John Simms , David Poyner
Characterisation of receptors can involve either assessment of their ability to bind ligands or measure receptor activation as a result of agonist or inverse agonist interactions. This review focuses on G protein-coupled receptors (GPCRs), examining techniques that can be applied to both receptors in membranes and after solubilisation. Radioligand binding remains a widely used technique, although there is increasing use of fluorescent ligands. These can be used in a variety of experimental designs, either directly monitoring ligand itself with techniques such as fluorescence polarisation or indirectly via resonance energy transfer (fluorescence/Forster resonance energy transfer, FRET and bioluminescence resonance energy transfer, BRET). Label free techniques such as isothermal titration calorimetry (ITC) and surface plasmon resonance (SPR) are also increasingly being used. For GPCRs, the main measure of receptor activation is to investigate the association of the G protein with the receptor. The chief assay measures the receptor-stimulated binding of GTP or a suitable analogue to the receptor. The direct association of the G protein with the receptor has been investigated via resonance energy techniques. These have also been used to measure ligand-induced conformational changes within the receptor; a variety of experimental techniques are available to incorporate suitable donors and acceptors within the receptor.
中文翻译:
G蛋白偶联受体的功能表征
受体的表征可以包括评估它们结合配体的能力或测量受体激活作为激动剂或反向激动剂相互作用的结果。本综述重点关注 G 蛋白偶联受体 (GPCR),研究可应用于膜中和增溶后两种受体的技术。尽管荧光配体的使用越来越多,但放射性配体结合仍然是一种广泛使用的技术。这些可用于各种实验设计,可以使用荧光偏振等技术直接监测配体本身,也可以通过共振能量转移(荧光/福斯特共振能量转移,FRET 和生物发光共振能量转移,BRET)间接监测配体本身。等温滴定量热法 (ITC) 和表面等离子体共振 (SPR) 等无标记技术也越来越多地被使用。对于 GPCR,受体激活的主要措施是研究 G 蛋白与受体的关联。主要测定测量受体刺激的 GTP 或合适的类似物与受体的结合。已经通过共振能量技术研究了 G 蛋白与受体的直接关联。这些也被用于测量受体内配体诱导的构象变化;有多种实验技术可用于在受体中加入合适的供体和受体。主要测定测量受体刺激的 GTP 或合适的类似物与受体的结合。已经通过共振能量技术研究了 G 蛋白与受体的直接关联。这些也被用于测量受体内配体诱导的构象变化;有多种实验技术可用于在受体中加入合适的供体和受体。主要测定测量受体刺激的 GTP 或合适的类似物与受体的结合。已经通过共振能量技术研究了 G 蛋白与受体的直接关联。这些也被用于测量受体内配体诱导的构象变化;有多种实验技术可用于在受体中加入合适的供体和受体。
更新日期:2018-09-01
中文翻译:
G蛋白偶联受体的功能表征
受体的表征可以包括评估它们结合配体的能力或测量受体激活作为激动剂或反向激动剂相互作用的结果。本综述重点关注 G 蛋白偶联受体 (GPCR),研究可应用于膜中和增溶后两种受体的技术。尽管荧光配体的使用越来越多,但放射性配体结合仍然是一种广泛使用的技术。这些可用于各种实验设计,可以使用荧光偏振等技术直接监测配体本身,也可以通过共振能量转移(荧光/福斯特共振能量转移,FRET 和生物发光共振能量转移,BRET)间接监测配体本身。等温滴定量热法 (ITC) 和表面等离子体共振 (SPR) 等无标记技术也越来越多地被使用。对于 GPCR,受体激活的主要措施是研究 G 蛋白与受体的关联。主要测定测量受体刺激的 GTP 或合适的类似物与受体的结合。已经通过共振能量技术研究了 G 蛋白与受体的直接关联。这些也被用于测量受体内配体诱导的构象变化;有多种实验技术可用于在受体中加入合适的供体和受体。主要测定测量受体刺激的 GTP 或合适的类似物与受体的结合。已经通过共振能量技术研究了 G 蛋白与受体的直接关联。这些也被用于测量受体内配体诱导的构象变化;有多种实验技术可用于在受体中加入合适的供体和受体。主要测定测量受体刺激的 GTP 或合适的类似物与受体的结合。已经通过共振能量技术研究了 G 蛋白与受体的直接关联。这些也被用于测量受体内配体诱导的构象变化;有多种实验技术可用于在受体中加入合适的供体和受体。