With the release and use of the Becton Dickenson FACS Diva Software, the use of Area as the default parameter came into play. As such, the use of area as a calculated parameter, methods were needed to be employed to ensure doublet discrimination and proper display on standard FSC/SSC. Improper setting of forward area scaling can alter the display cell populations. This combined with improper area gating strategy can lead to doublet inclusion which in sorting rare events can compromise sort purity. In extreme cases where area scaling with the individual lasers is ignored, differences can exist between Area and Height where compensation will likely not be optimal, particularly if one parameter - usually height is saturated. In addition, area scaling can impact population grouping. As FSC and individual laser area scaling is a function of event size, the most common error is to accept the setting determined by CS&T, which are 3.2 µm particles and proceed with the sample(s) without regard to the sample's actual size. With cellular events smaller or more likely larger than the CS&T beads, this will make the area scaling settings less than optimal. Analysis and sorting rare events with populations larger than the CS&T beads can be compromised if adjustments in FSC area scaling are not addressed. Proper FSC and laser area scaling must be determined empirically for each sample. Examples of the effects of sample size on area scaling will be presented in addition to gating and templates for determining area scaling.

中文翻译：

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使用 FACS DIVA 软件进行区域缩放的重要性

随着 Becton Dickenson FACS Diva 软件的发布和使用，使用区域作为默认参数开始发挥作用。因此，使用面积作为计算参数，需要采用方法来确保双峰区分和标准 FSC/SSC 上的正确显示。前向区域缩放设置不当会改变显示单元格数量。这与不正确的区域门控策略相结合会导致双重包含，这在排序罕见事件时会损害排序纯度。在忽略单个激光器的面积缩放的极端情况下，面积和高度之间可能存在差异，其中补偿可能不是最佳的，特别是如果一个参数 - 通常是高度饱和。此外，区域缩放会影响人口分组。由于 FSC 和单个激光区域缩放是事件大小的函数，最常见的错误是接受 CS&T 确定的设置，即 3.2 µm 颗粒，并在不考虑样品的实际尺寸的情况下继续处理样品。由于细胞事件比 CS&T 珠子更小或更可能更大，这将使区域缩放设置不是最佳的。如果不解决 FSC 区域缩放的调整问题，分析和分类数量大于 CS&T 珠的罕见事件可能会受到影响。必须根据经验为每个样品确定适当的 FSC 和激光区域缩放。除了用于确定区域比例的门控和模板之外，还将介绍样本大小对区域比例影响的示例。s 实际尺寸。由于细胞事件比 CS&T 珠子更小或更可能更大，这将使区域缩放设置不是最佳的。如果不解决 FSC 区域缩放的调整问题，分析和分类数量大于 CS&T 珠的罕见事件可能会受到影响。必须根据经验为每个样品确定适当的 FSC 和激光区域缩放。除了用于确定区域比例的门控和模板之外，还将介绍样本大小对区域比例影响的示例。s 实际尺寸。由于细胞事件比 CS&T 珠子更小或更可能更大，这将使区域缩放设置不是最佳的。如果不解决 FSC 区域缩放的调整问题，分析和分类数量大于 CS&T 珠的罕见事件可能会受到影响。必须根据经验为每个样品确定适当的 FSC 和激光区域缩放。除了用于确定区域比例的门控和模板之外，还将介绍样本大小对区域比例影响的示例。必须根据经验为每个样品确定适当的 FSC 和激光区域缩放。除了用于确定区域比例的门控和模板之外，还将介绍样本大小对区域比例影响的示例。必须根据经验为每个样品确定适当的 FSC 和激光区域缩放。除了用于确定区域比例的门控和模板之外，还将介绍样本大小对区域比例影响的示例。