A rapid analytical approach, on-line desalting HPLC-UV-ESI-MS method, for the analysis of FIP-fve and flammutoxin (FTX), two important bioactive proteins in the fruiting bodies of Flammulina velutipes, was developed. In this study, a highly efficient desalting method is provided using molecular weight cut-off centrifugal filtration and on-line desalting. Sample preparation followed by an on-line desalting HPLC-UV-ESI-MS system was employed for simultaneous desalting and detection and identification of FIP-fve and FTX. Results indicated that using trifluoroacetic acid as a modifier on a C18 reversed-phase column renders effective separation. ESI-MS revealed that the apparent molecular masses of FIP-fve and FTX were 12,749.1 Da and 21,912.5 Da, respectively. Eleven milligrams of FIP-fve was obtained from 100 g of fresh fruiting bodies, and UV detection was performed at 280 nm using bovine serum albumin as the standard protein. The calibration curve was linear in the concentration range of 0.29-4.69 mg/mL (r2 = 0.9999). FTX and a series of degradation products were isolated from F. velutipes using 35% saturated ammonium sulfate on a DEAE cellulose column. The complete identification of FTX and a series of degradation products were carried out by precipitation of various ammonium sulfate concentrations (0-45%, 45-65% and 65-90%), in-gel trypsin digestion, and MS analysis with combined database search. The molecular weights of FTX and a series of degradation products were 29,957.2 Da, 27,480.2 Da, 26,512.5 Da, and 21,912.5 Da.

中文翻译：

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在线脱盐与HPLC-UV-ESI-MS相结合同时检测鉴定金针菇中的FIP-fve和金针菇毒素

开发了一种快速分析方法，即在线脱盐 HPLC-UV-ESI-MS 方法，用于分析金针菇子实体中两种重要的生物活性蛋白 FIP-fve 和金针菇毒素 (FTX)。在这项研究中，提供了一种使用截留分子量离心过滤和在线脱盐的高效脱盐方法。样品制备和在线脱盐 HPLC-UV-ESI-MS 系统用于同时脱盐和检测和鉴定 FIP-fve 和 FTX。结果表明，在 C18 反相色谱柱上使用三氟乙酸作为改性剂可实现有效分离。ESI-MS 显示 FIP-fve 和 FTX 的表观分子量分别为 12,749.1 Da 和 21,912.5 Da。从 100 g 新鲜子实体中获得了 11 毫克 FIP-fve，使用牛血清白蛋白作为标准蛋白，在 280 nm 处进行紫外检测。校准曲线在 0.29-4.69 mg/mL (r2 = 0.9999) 的浓度范围内呈线性。在 DEAE 纤维素柱上使用 35% 饱和硫酸铵从 F. velutipes 中分离出 FTX 和一系列降解产物。通过不同浓度硫酸铵（0-45%、45-65%和65-90%）的沉淀、凝胶内胰蛋白酶消化和结合数据库的MS分析，对FTX和一系列降解产物进行了完全鉴定搜索。FTX和一系列降解产物的分子量分别为29,957.2 Da、27,480.2 Da、26,512.5 Da和21,912.5 Da。69 毫克/毫升 (r2 = 0.9999)。在 DEAE 纤维素柱上使用 35% 饱和硫酸铵从 F. velutipes 中分离出 FTX 和一系列降解产物。通过不同浓度硫酸铵（0-45%、45-65%和65-90%）的沉淀、凝胶内胰蛋白酶消化和结合数据库的MS分析，对FTX和一系列降解产物进行了完全鉴定搜索。FTX和一系列降解产物的分子量分别为29,957.2 Da、27,480.2 Da、26,512.5 Da和21,912.5 Da。69 毫克/毫升 (r2 = 0.9999)。在 DEAE 纤维素柱上使用 35% 饱和硫酸铵从 F. velutipes 中分离出 FTX 和一系列降解产物。通过不同浓度硫酸铵（0-45%、45-65%和65-90%）的沉淀、凝胶内胰蛋白酶消化和结合数据库的MS分析，对FTX和一系列降解产物进行了完全鉴定搜索。FTX和一系列降解产物的分子量分别为29,957.2 Da、27,480.2 Da、26,512.5 Da和21,912.5 Da。45-65% 和 65-90%）、凝胶内胰蛋白酶消化和结合数据库搜索的 MS 分析。FTX和一系列降解产物的分子量分别为29,957.2 Da、27,480.2 Da、26,512.5 Da和21,912.5 Da。45-65% 和 65-90%）、凝胶内胰蛋白酶消化和结合数据库搜索的 MS 分析。FTX和一系列降解产物的分子量分别为29,957.2 Da、27,480.2 Da、26,512.5 Da和21,912.5 Da。