The estimation of post-mortem interval (PMI) is a crucial part for investigations of crime and untimely deaths in forensic science. However, standard methods of PMI estimation are easily confounded by extenuating circumstances and/or environmental factors. Therefore, a panel of PMI markers obtained from a more acceptable and accurate method is necessary to definitely determine time of death. Saliva, one of the vital fluids encountered at crime scenes, contains various glycoproteins that are highly affected by biochemical environment. Here, we investigated saliva N-glycans between live and dead rats to determine the alteration of N-glycans using an animal model system because of the limitation of saliva collection from recently deceased humans. Rat saliva samples were collected both before and after death. N-Glycans were enzymatically released by PNGase F without any glycoprotein extraction. Released native glycans were purified and enriched by PGC-SPE. About 100 N-glycans were identified, profiled, and structurally elucidated by nano LC/MS and tandem MS. Sialylated N-glycans were exclusively present in abundance in live rat saliva whereas non-sialylated N-glycans including LacdiNAc disaccharides were detected in high level following death. Through in-depth investigations using quantitative comparison and statistical analysis, 14 N-glycans that significantly changed after death were identified as the potential marker candidates for PMI estimation. To the best of our knowledge, this is the first study to monitor the post-mortem changes of saliva glycosylation, with obvious forensic applications.

死后时间间隔（PMI）的估计是调查法医学中犯罪和过早死亡的关键部分。但是，通过减轻环境和/或环境因素，很容易混淆PMI估算的标准方法。因此，从更可接受和更准确的方法获得的一组PMI标记对于确定死亡时间是必不可少的。唾液是犯罪现场遇到的重要液体之一，其中含有受生化环境高度影响的各种糖蛋白。在这里，我们调查了在活的和死的大鼠之间的唾液N-聚糖以确定使用动物模型系统的N-聚糖的变化，因为从新近死去的人收集唾液的局限性。在死亡之前和之后都收集大鼠唾液样品。N-聚糖由PNGase F酶促释放，没有任何糖蛋白提取。通过PGC-SPE纯化并富集释放的天然聚糖。通过纳米LC / MS和串联MS鉴定，鉴定并在结构上阐明了约100种N-聚糖。唾液酸化的N-聚糖仅大量存在于活大鼠唾液中，而死亡后高水平检测到非唾液酸化的N-聚糖，包括LacdiNAc二糖。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-聚糖，作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。通过PGC-SPE纯化并富集释放的天然聚糖。通过纳米LC / MS和串联MS鉴定，鉴定并在结构上阐明了约100种N-聚糖。唾液酸化的N-聚糖仅大量存在于活大鼠唾液中，而死亡后高水平检测到非唾液酸化的N-聚糖，包括LacdiNAc二糖。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-糖苷，可以作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。通过PGC-SPE纯化并富集释放的天然聚糖。通过纳米LC / MS和串联MS鉴定，鉴定并在结构上阐明了约100种N-聚糖。唾液酸化的N-聚糖仅大量存在于活大鼠唾液中，而死亡后高水平检测到非唾液酸化的N-聚糖，包括LacdiNAc二糖。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-聚糖，作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。并通过纳米LC / MS和串联MS对其结构进行了阐明。唾液酸化的N-聚糖仅大量存在于活大鼠唾液中，而死亡后高水平检测到非唾液酸化的N-聚糖，包括LacdiNAc二糖。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-糖苷，可以作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。并通过纳米LC / MS和串联MS进行了结构阐明。唾液酸化的N-聚糖仅大量存在于活大鼠唾液中，而死亡后高水平检测到非唾液酸化的N-聚糖，包括LacdiNAc二糖。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-糖苷，可以作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-糖苷，可以作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。通过使用定量比较和统计分析进行的深入调查，确定了14种在死亡后发生显着变化的N-糖苷，可以作为PMI估计的潜在标志物。据我们所知，这是第一项监测唾液糖基化的事后变化的研究，具有明显的法医学应用。