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2017-01-23 10:02
分析蛋白质三级结构的技术手段有哪些?
在生物化学中,蛋白质三级结构是指蛋白质整体几何形状,是一条多肽链在二级或超二级结构甚至结构域上进一步盘绕,折叠,依靠次级键的维系固定所形成的特定空间结构。请问分析蛋白质三级结构的技术手段有哪些?它们各有什么特点?
在生物化学中,蛋白质三级结构是指蛋白质整体几何形状,是一条多肽链在二级或超二级结构甚至结构域上进一步盘绕,折叠,依靠次级键的维系固定所形成的特定空间结构。请问分析蛋白质三级结构的技术手段有哪些?它们各有什么特点?
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匿名用户   回答了这个问题

测定蛋白质三维结构的方法主要有X射线晶体衍射分析,电镜三维重构技术以及核磁共振技术。 一、X射线晶体衍射分析(X-ray Crystallography)主要包括以下几个步骤: 1. 晶体培养。结构测定的精度依赖于晶体所能达到的衍射分辨率,所以获得具有强衍射能力的晶体是蛋白质晶体结构测定分析的关键步骤,是蛋白质晶体结构分析的瓶颈。 2. 数据收集和处理。一般来讲,中等大小晶胞的一套高分辨率数据,至少要收集几万个衍射强度数据,在经过专门的数据处理程序包处理,给出这一套数据的各种统计结果,以判断数据质量的好坏。 3. 测定相位。用 X 射线衍射方法测定晶体结构,其核心问题是解决每个衍射点的相位问题。对小分子可以利用 Patterson 函数计算出晶胞中原子的位置,但是大分子不可能利用这种方法,只能利用其他方法如同晶置换法才能确定相位。 4. 相位的改进。电子密度图的质量及其后的可解释性主要决定于相角的准确性。在某些情况下采用晶胞不对称单元中等同部分的电子密度平均,有可能大大改善误差较大的起始相角。 5. 电子密度图的计算和解释。有了每个衍射点的相位,加上已经收集到的每个衍射点的结构振幅,就可计算电子密度图。由于蛋白质分子结构的复杂性,它的电子密度图随着分辨率的不同,从图上能识别出的结构层次也不同。 6. 结构模型修正。从电子密度图上最初建立的蛋白质分子结构模型是比较粗糙的,需要进一步精华。 二、核磁共振主要步骤如下: 先准备样品,浓缩蛋白质的水溶液(0.21-1mM),如果测1H谱需用D代试剂,将样品置于外加磁场中,测量共振频率,计算机通过频率得出每一对原子核的偶合常数和NOE值,计算对应的原子间距离。最后构建模型。 三、三维电镜方法的主要原理是中心截面定理: 二维投影(电镜照片)的傅立叶变换=物体的三维傅立叶变换的一个中央截面 X 射线晶体衍射分析就是用于测定晶体的结构,核磁共振除了测定分子结构之外还有很多方面的应用。例如研究脂的多型性,离子浓度测定(如细胞内 Na+的测定),活体中磷代谢的研究,核磁成像(恒定磁场加梯度磁场)等。三维电镜方法主要分为三种手段:电子晶体学,单颗粒技术和电子断层成像技术。在电镜下观察生物大分子时,观察的对象是三维结构,电镜图像是这些三维结构的二维投影。三维电镜技术不需要结晶,没有相位问题,最新发展的冷冻制样技术使样品更好的保持在生理状态,且没有分子量限制,甚至细胞也可以进行三维重构。
测定蛋白质三维结构的方法主要有X射线晶体衍射分析,电镜三维重构技术以及核磁共振技术。一、X射线晶体衍射分析(X-ray Crystallography)主要包括以下几个步骤:1. 晶体培养。结构测定的精度依赖于晶体所能达到的衍射分辨率,所以获得具有强衍射能力的晶体是蛋白质晶体结构测定分析的关键步骤,是蛋白质晶体结构分析...显示全部
2017-01-17 18:10
钙黄绿素-AM和PI混合液对细菌死活染色?
采用钙黄绿素-AM和PI混合染色(10um/l),37度染色15min,为什么正常的细菌无法看到蓝色荧光?我们采用的是490激发,可以看到非常明亮的红色荧光
采用钙黄绿素-AM和PI混合染色(10um/l),37度染色15min,为什么正常的细菌无法看到蓝色荧光?我们采用的是490激发,可以看到非常明亮的红色荧光
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匿名用户   回答了这个问题

假设试剂质量没问题,要考虑不同细胞体系需要不同的染色浓度等条件,建议先用已知最佳染色条件的标准细胞,如HeLa细胞进行试验,作为正对照,排除试剂质量和操作等可能因素后,调节染色剂看看效果变化如何。可以参考http://www.dojindo.cn/operatingInstructions/detailed.aspx?type=4&id=1068
假设试剂质量没问题,要考虑不同细胞体系需要不同的染色浓度等条件,建议先用已知最佳染色条件的标准细胞,如HeLa细胞进行试验,作为正对照,排除试剂质量和操作等可能因素后,调节染色剂看看效果变化如何。可以参考http://www.dojindo.cn/operatingInstructions/detailed.aspx?...显示全部
2016-12-30 11:04
问一下环氧基团链霉亲和素的结合问题?
本人在做实验的过程中出现了一个瓶颈,就是如何把环氧开环与链霉亲和素有效的结合起来。综合有关文献记录,环氧基在酸性和碱性条件下都可以开环。 现在我所做的是环氧基团在碱性条件下与链霉亲和素反应,发现结合的效率很低。如果在酸性条件下,环氧基团开环会形成相邻的醇羟基,但与链霉亲和素上面的氨基不反应。所以想求助一个合适的反应条件以及合适的检测方法。谢谢啦
本人在做实验的过程中出现了一个瓶颈,就是如何把环氧开环与链霉亲和素有效的结合起来。综合有关文献记录,环氧基在酸性和碱性条件下都可以开环。现在我所做的是环氧基团在碱性条件下与链霉亲和素反应,发现结合的效率很低。如果在酸性条件下,环氧基团开环会形成相邻的醇羟基,但与链霉亲和素上面的氨基不反应。所以想求助一个合适的反应条件以...显示全部
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你在碱性条件下反应的温度是多少?
你在碱性条件下反应的温度是多少?
2016-12-28 23:12
壳聚糖到底要怎么样才能溶解?
我尝试了1%和2%醋酸 加热 都不行呀
我尝试了1%和2%醋酸 加热 都不行呀
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匿名用户   回答了这个问题

你先看看这个有没有帮助http://wenku.baidu.com/view/5913bb2c2af90242a895e51a.html
你先看看这个有没有帮助http://wenku.baidu.com/view/5913bb2c2af90242a895e51a.html
2016-12-27 21:59
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匿名用户   回答了这个问题

我觉得,成功克隆意味着对其基因编码,转录,翻译的全部过程都有比较全面的了解,但是这和对其生物功能的认识是完全不同的两码事。想获得三维结构还是要靠X光衍射,NMR,电镜等方法来测量
我觉得,成功克隆意味着对其基因编码,转录,翻译的全部过程都有比较全面的了解,但是这和对其生物功能的认识是完全不同的两码事。想获得三维结构还是要靠X光衍射,NMR,电镜等方法来测量
2016-12-25 00:05
亚硫酸氢钠可以121摄氏度灭菌吗?
是添加到细胞培养体系中的,但是有看到亚硫酸钠高温会分解,故来询问亚硫酸钠可以高温灭菌吗?求经验人士解答,谢谢!
是添加到细胞培养体系中的,但是有看到亚硫酸钠高温会分解,故来询问亚硫酸钠可以高温灭菌吗?求经验人士解答,谢谢!
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匿名用户   回答了这个问题

这种情况下,亚硫酸钠可能会氧化
这种情况下,亚硫酸钠可能会氧化
2016-12-20 14:48
PCR非特异性条带?
PCR非特异性条带太多
PCR非特异性条带太多
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匿名用户   回答了这个问题

太多可能性了。引物设计是否合理、引物纯度是否有问题、聚合酶的活性、模板DNA纯度、Buffer是否合适、温度是否合理,etc.,和实验室的师兄师姐讨论一下吧,挨个排除。
太多可能性了。引物设计是否合理、引物纯度是否有问题、聚合酶的活性、模板DNA纯度、Buffer是否合适、温度是否合理,etc.,和实验室的师兄师姐讨论一下吧,挨个排除。
2016-11-25 20:32
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普天同庆 中国海洋大学   回答了这个问题

是指的计算机辅助药物设计方面,还是整个药物化学方面呢
是指的计算机辅助药物设计方面,还是整个药物化学方面呢
2016-11-22 11:25
脱硫弧菌属,荚硫菌属的菌种国内哪里有提供?
国外代理时间长,现在要短期内使用,只要是这两个属里面的菌种都可以,只要容易获得就行。
国外代理时间长,现在要短期内使用,只要是这两个属里面的菌种都可以,只要容易获得就行。
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匿名用户   回答了这个问题

你试试联系一下这篇文章的作者http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn/ch/reader/download_pdf.aspx?file_no=tb09091324&year_id=2009&quarter_id=9&falg=1
你试试联系一下这篇文章的作者http://journals.im.ac.cn/wswxtbcn/ch/reader/download_pdf.aspx?file_no=tb09091324&year_id=2009&quarter_id=9&falg=1
2016-11-14 19:32
国内哪里有可以产氢的桃红荚硫菌?
一种厌氧光合细菌,拉丁学名:Thiocapsa Roseopersicina
一种厌氧光合细菌,拉丁学名:Thiocapsa Roseopersicina
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匿名用户   回答了这个问题

这篇文章提到可以从环境中提取检出 http://www.cqvip.com/QK/93239X/200003/4468918.html
这篇文章提到可以从环境中提取检出 http://www.cqvip.com/QK/93239X/200003/4468918.html
2016-11-09 09:39
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2016-11-09 08:56
关于RNA的一些问题?
如图,○表示作用位点,红线表示要合成片段所在tmRNA的位置(80-120) 实际为: AAAUAA GCGCCG AUUCAC AUCAGC GCGACU ACGCU CUCGC UGCCUAA(47个) 大部分为无结构的区域。 Q: 1.请问如果想部分合成上述片段,截取多少为合适?(目的想初步判断是否有相互作用)全长合成直接作用是否合适? 2. 合成RNA的公司有哪几家?RNA 的合成类型有哪些? 3. 请问在非标的状态下,实验室主要有哪些验证蛋白质和RNA作用的方法?实验所需要的RNA的用量如何?相对快速的检验方法是哪一种呢?
如图,○表示作用位点,红线表示要合成片段所在tmRNA的位置(80-120) 实际为: AAAUAA GCGCCG AUUCAC AUCAGC GCGACU ACGCU CUCGC UGCCUAA(47个) 大部分为无结构的区域。 Q: 1.请问如果想部分合成上述片段,截取多少为合适?(目的想初步判断是否有相互作用)全...显示全部
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TJ Chang   回答了这个问题

大连宝生物和上海生工都有RNA合成业务。上海生工一般合成RNAi使用,会把互补链也给一起合成,提交用户一般是双链RNA,若需要单链要特别说明。序列长度20到30都可以合成,需要用无RNA酶的DEPC水溶解,负八十度保存。与蛋白相互作用可以试试凝胶阻滞电泳,一般微摩尔量级,银染可以检测。
大连宝生物和上海生工都有RNA合成业务。上海生工一般合成RNAi使用,会把互补链也给一起合成,提交用户一般是双链RNA,若需要单链要特别说明。序列长度20到30都可以合成,需要用无RNA酶的DEPC水溶解,负八十度保存。与蛋白相互作用可以试试凝胶阻滞电泳,一般微摩尔量级,银染可以检测。
2016-11-02 10:40
怎样区分细菌耐药性?
通过怎样的方法可以简便的判断细菌是否具有耐药性?
通过怎样的方法可以简便的判断细菌是否具有耐药性?
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匿名用户   回答了这个问题

看看这个有没有帮助http://wenku.baidu.com/view/a2c6d3175f0e7cd1842536d2.html
看看这个有没有帮助http://wenku.baidu.com/view/a2c6d3175f0e7cd1842536d2.html
2016-10-31 22:43
scientific report?
调到三区后,影响因子会下降吗?预测下
调到三区后,影响因子会下降吗?预测下
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Raiy-Jiang 浙江工业大学   回答了这个问题

因果关系反了。这杂志水的太多导致影响因子有明显降低,口碑变差,就降级了。
因果关系反了。这杂志水的太多导致影响因子有明显降低,口碑变差,就降级了。
2016-10-28 17:23
如何有效提取菠菜叶类囊体并检测活性?
我想做一些与类囊体相关的电化学实验,怎么验证我是否成功提取了类囊体了呢?confocol可以么?有大神做过么?
我想做一些与类囊体相关的电化学实验,怎么验证我是否成功提取了类囊体了呢?confocol可以么?有大神做过么?
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匿名用户   回答了这个问题

你试过这个办法了吗?http://www.docin.com/p-644536593.html
你试过这个办法了吗?http://www.docin.com/p-644536593.html
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